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海洋研究所 [1]
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专利 [1]
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2007 [1]
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专题:海洋研究所
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一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法
专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200510047579.8, 申请日期: 2007-05-02, 公开日期: 2007-05-02
朱香萍
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尤锋
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张培军
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孙威
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徐永立
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提交时间:2014/08/04
权利要求书1
②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵
③在常温下用浓度百分比为1-2%的Triton-100对样品进行打孔处理
其中:磷酸盐缓冲液成分为128mM NaCl
④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色
抚育一抗过夜
清洗液为含有155mM NaCl
抗体稀释液含有浓度百分比为10%的山羊血清和5%的二甲亚砜的Tris盐酸缓冲液
⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。
一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法
并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来
再在含有80-200mM NaBH4的磷酸盐缓冲液中
2mM KCl
其中:抚育抗体前非特异结合位点不封闭
抚育二抗为避光2-4小时
10mM Tris-Cl
其特征在于包括步骤如下:①采用改进的哌嗪-N
室温下抚育6-16小时
8mM NaH2PO4
pH为7.2-7.4的Tris盐酸缓冲液
N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定
2mMKH2PO4
及诺纳德P-40
受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时
pH 7.2-7.4
其中诺纳德P-40占Tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2%
磷酸吐温缓冲溶液清洗
然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存
待用
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