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	一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法
	朱香萍 ; 尤锋 ; 张培军 ; 孙威 ; 徐永立
	2007-05-02
专利号	CN200510047579.8
专利类型	发明
关键词	权利要求书1 ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵 ③在常温下用浓度百分比为1-2％的Triton-100对样品进行打孔处理 其中：磷酸盐缓冲液成分为128mM NaCl ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色 抚育一抗过夜 清洗液为含有155mM NaCl 抗体稀释液含有浓度百分比为10％的山羊血清和5％的二甲亚砜的Tris盐酸缓冲液 ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。 一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法 并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来 再在含有80-200mM NaBH4的磷酸盐缓冲液中 2mM KCl 其中：抚育抗体前非特异结合位点不封闭 抚育二抗为避光2-4小时 10mM Tris-Cl 其特征在于包括步骤如下：①采用改进的哌嗪-N 室温下抚育6-16小时 8mM NaH2PO4 pH为7.2-7.4的Tris盐酸缓冲液 N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定 2mMKH2PO4 及诺纳德P-40 受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时 pH 7.2-7.4 其中诺纳德P-40占Tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2％ 磷酸吐温缓冲溶液清洗 然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存 待用
权利人	中国科学院海洋研究所.
中文摘要	本发明公开一种鲆鲽鱼类受精卵细胞骨架的免疫荧光显微观察技术。首先采用改进的固定液对样品进行固定，然后用解剖针将胚盘从整个胚胎中剥离出来，对样品进行打孔处理，并用硼氢化钠降低或消除未结合的醛基对实验结果的影响，再对样品进行间接免疫荧光染色，最后用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对样品进行观察。该发明的优点是操作过程简单，结果清晰度高，立体感强，可用于鲆鲽鱼类受精卵从胚盘形成到2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞等发育时期的微管骨架的动态变化研究，也适用于同属浮性卵、多卵黄的其它海水鱼类卵的免疫组化研究中，其适用范围广泛。
公开日期	2007-05-02
申请日期	2005-10-28
语种	中文
专利申请号	CN200510047579.8
内容类型	专利
源URL	[http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17400]
专题	海洋研究所_实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	朱香萍,尤锋,张培军,等. 一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法. CN200510047579.8. 2007-05-02.

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