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浏览/检索结果: 共5条，第1-5条 帮助 限定条件 专题：海洋研究所    第一署名单位    第一作者单位    通讯作者单位     已选(0)清除 条数/页：5101520253035404550556065707580859095100   排序方式：请选择作者升序作者降序题名升序题名降序发表日期升序发表日期降序提交时间升序提交时间降序 一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 专利 专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10 作者:  刘保忠 收藏  |  浏览/下载：19/0  |  提交时间：2014/08/04 一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法  2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件Primer?Premier?5.0设计引物  GC含量为40％?60％  退火温度为45?65℃  预期PCR产物长度为100?400bp  3)引物优化：根据不同引物的Tm值进行温度梯度优化  4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)衡量  包括微卫星位点来源  引物设计条件为：引物长度为19?25mer  在Tm值上下各10℃  根据上述优化获得的Ta值  引物设计  温度梯度优化扩增得到的PCR产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?EB染色系统进行检测  选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)进而衡量多态性信息  引物优化和微卫星标记家系鉴定体系  选取杂带较少  根据PIC值  其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组DNA利用提取的DNA  特异性产物亮度较高的PCR反应对应的温度为该引物的最佳退火温度Ta  PIC小于0.25的标记  采用限制性内切酶法获得文蛤基因组DNA片段  筛选得到重复性好  并构建微卫星磁珠富集文库  稳定性好  检测阳性克隆  PIC值大于0.25的位点  经测序得到含有微卫星重复的DNA序列  作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系  用于文蛤的家系区分与个体识别。   一种植物空心胶囊生物等效性评价方法 专利 专利类型: 发明, 专利号: CN200910255701.9, 申请日期: 2011-06-22, 公开日期: 2011-06-22 韩丽君; 袁毅; 李敬; 吴佩 收藏  |  浏览/下载：59/0  |  提交时间：2014/08/04 一种植物空心胶囊生物等效性评价方法  (2)取植物空心胶囊  制成口服给药药剂  (3)分别取服用上述药后20?30分钟中青年人或动物静脉血浆200?250μL  直至中青年人或动物服药后10?12小时为止  (4)分别于各组所取待测血浆加入内标液600?650μL  测定血浆中布洛芬的含量的变化  根据采集志愿者血浆获得的血药浓度?时间数据  以明胶空心胶囊布洛芬胶囊剂为参比计算相对生物利用度  根据生物利用度评价生物等效性  其特征在于：(1)按重量比计  动物明胶空心胶囊分别充填布洛芬混合物0.25?0.40克  剂量分别为中青年人或动物每次口服1?2粒  以后每间隔30?120分钟取服药后20?30分钟中青年人或动物静脉血浆200?250μL  共需静脉血浆10?16份  内标液为浓度10mg/L甲醇的吲哚美辛  用DAS?2.0计算主要药代动力学参数  采用[1?2α]置信区间法分析其生物等效性。  布洛芬纯品80?100％  振荡  包括峰浓度(Cmax)  淀粉和/或硬脂酸镁含量为20％的混合物为固定模型药物标准品  12000?18000rpm离心8?12min  达峰时间(Tmax)及平均残留时间(MRT)  取上清  高效液相色谱测定  检测波长为220?230nm   栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法 专利 专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03 宋林生; 李凌; 赵建民 收藏  |  浏览/下载：24/0  |  提交时间：2014/08/04 1  2)抗病群体和敏感群体的制备  3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选  4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆：参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA  根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物  即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体  PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后  其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别  一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记  克隆得到一段762个碱基的DNA序列  用病原菌浸泡感染  针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切  而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体  其特征在于它的技术内容包括以下四个方面：1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆  连入T载体后进行测序  根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力  聚丙烯酰胺凝胶电泳后  -391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此  获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备：采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体  将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选：对来自5个个体的10个克隆进行了测序  各发现两种基因型  将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记  发现了10处多态性位点  -754II  而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查：取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版  -754ID  PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列  -391AA和-391AG  用Hap II对产物进行酶切  聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后  选择-391AG个体作为抗病个体。   龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法 专利 专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20 段德麟; 李文红; 胡自民 收藏  |  浏览/下载：47/0  |  提交时间：2014/08/04 1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法  提取缓冲液的组成为：100mmolL-1Tris.HCl  (2)PCR扩增：龙须菜ITS区扩增的特异引物P1  P2：5’GGGATCCATATGCTTAAGTTCAGCGGGT3’  利用该引物对步骤(1)提取的DNA为模板  (3)PCR产物纯化  (4)DNA序列测定：纯化后的DNA进行序列测定  (5)DNA序列数据分析：待分析的rDNAITS区的序列一经测定  建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的RAPD和ISSR特异指纹图谱  2)RAPD和ISSR引物的合成  3)根据扩增条带的多态性  其特征在于：龙须菜的rDNAITS全序列的获取  pH8.0  P2的序列分别为：P1：5’GGGATCCGTTTCCGTAGGTGAACCTGC3’  位于26S上  对总DNA进行PCR扩增反应  确立rDNAITS区  用对位排列软件ClustalW进行对位排列  步骤如下：1)总DNA提取  从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物  构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的RAPD和ISSR特异指纹图谱。  步骤如下：(1)总DNA提取：取新鲜健康的藻体材料  50-100mmolL-1EDTA  位于18S上  包括ITS1和5.8S区的全序列  并辅以人工校对  用无菌水处理后  0.2-0.5MNaCl  用系统进化分析各样品DNA序列与数据库中各个序列间的差异  在液氮种研磨成粉末  5％β-巯基乙醇  提取总DNA  0.2％PVP-40  1.0-2.5％SDS  提取所用的KAc浓度为4.0-5.0M  pH值范围在5.2-7.5   中国对虾抗菌肽基因的重组表达与应用 专利 专利类型: 发明, 专利号: CN03112294.9, 申请日期: 2003-12-03, 公开日期: 2003-12-03 作者:  相建海 收藏  |  浏览/下载：11/0  |  提交时间：2014/08/04 1.中国对虾抗菌肽基因的重组表达方法  所述的转化与筛选是：将构建得到的载体分别转化大肠杆菌和酵母菌及转染昆虫细胞  所述的表达产物鉴定  包括重组载体构建  筛选工程菌株或细胞并诱导表达  纯化和抗菌谱测定是：采用诱导剂诱导表达的工程菌  转化与筛选和表达产物鉴定  破细胞收集上清液  纯化和抗菌谱测定其特征在于  分泌型表达的细胞直接收集上清液  所述的重组载体构建是：根据已克隆到的对虾素成熟肽的cDNA序列  采用层析的方法纯化抗菌肽  利用特异引物在其两端引入两个不同的限制性内切酶位点  并测定抗菌谱。  亚克隆到表达载体  载体包括pET系列  pGEX-4T系列  pPIC系列  pAO815和杆状病毒表达载体