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海洋研究所 [1]
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专利 [1]
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2008 [1]
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栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法
专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03
宋林生
;
李凌
;
赵建民
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浏览/下载:24/0
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提交时间:2014/08/04
1
2)抗病群体和敏感群体的制备
3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选
4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆:参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA
根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物
即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体
PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后
其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别
一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记
克隆得到一段762个碱基的DNA序列
用病原菌浸泡感染
针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切
而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体
其特征在于它的技术内容包括以下四个方面:1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆
连入T载体后进行测序
根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力
聚丙烯酰胺凝胶电泳后
-391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此
获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备:采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体
将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选:对来自5个个体的10个克隆进行了测序
各发现两种基因型
将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记
发现了10处多态性位点
-754II
而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查:取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版
-754ID
PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列
-391AA和-391AG
用Hap II对产物进行酶切
聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后
选择-391AG个体作为抗病个体。
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