题名 | 人源抗体酶GPX的可溶性表达及生物活性研究 |
作者 | 齐小杰 |
学位类别 | 博士 |
答辩日期 | 2001 |
授予单位 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
授予地点 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
关键词 | 谷胱甘肽过氧化物酶 含硒抗体酶 可溶性表达 生物活性 |
学位专业 | 无机化学 |
中文摘要 | 谷胱甘肽过氧化物酶 (Glutathione Peroxidase, GPX),是生物体内抗氧化应激酶系的重要成员,它可以清除脂质氢过氧化物(ROOH)及过氧化氢 (H_2O_2),保护机体免受活性氧的损伤或减少活性氧对机体的损伤程度。为了解决鼠源抗体酶GPX应用于人体时会诱发人抗鼠反应 (Human Anti-Mouse Antibody)这一问题,我们实验室从人单链抗体库中筛选了特异的抗体,经化学修饰后得到了具有GPX活性的抗体酶。本文在此工作的基础上,对己筛选出的人单链抗体基因进行了可溶性表达,并用化学修饰的方法进行硒化,得到了GPX活力为80U/μmol的抗体酶。根据优化的表达条件,直接得到了具有天然结构的抗体蛋白,省去了原来的包含体表达中的变性、复性步骤。且所得的抗体为融合蛋白,在蛋白的末端接有6个连续的组氨酸,因此用Ni-NTA亲和层析柱对其进行了一步纯化,即得到了纯抗体蛋白。从而大大的简化了抗体酶的制备过程。本论文还对抗体酶的生物活性进行了研究。采用H_2O_2/Fe~(2+) 自由基发生系统,分别以线粒体的膨胀度、乙二醛生成量和自由基含量为不同的损伤指标进行测量,研究了抗体酶对自由基损伤的牛心线粒体的保护作用。实验结果表明,硒化后的抗体酶具有较强的保护作用。 |
语种 | 中文 |
公开日期 | 2011-01-17 |
页码 | 70 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.ciac.jl.cn/handle/322003/34109] ![]() |
专题 | 长春应用化学研究所_长春应用化学研究所知识产出_学位论文 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 齐小杰. 人源抗体酶GPX的可溶性表达及生物活性研究[D]. 中国科学院长春应用化学研究所. 中国科学院长春应用化学研究所. 2001. |
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