| 题名 | 生物素标记法钓取淫羊藿素促进骨形成受体的研究 |
| 作者 | 魏振龙 |
| 答辩日期 | 2018 |
| 导师 | 王鸣刚 |
| 关键词 | 淫羊藿素 成骨细胞 Biacore G蛋白偶联受体 趋化因子受体4 AMD3100 |
| 学位名称 | 硕士 |
| 英文摘要 | 淫羊藿素是一种具有促进骨形成活性的中草药淫羊藿有效单体成分,是中医治疗骨质疏松的首选药物,应用前景广阔。淫羊藿素属于黄酮类化合物具有植物雌激素活性这可能是其促进骨形成活性机制之一;其二目前研究发现淫羊藿素在促进骨形成过程中具有激活非雌激素信号通路活性的能力如:BMP(Bone morphogenetic protein)、MAPK(Mitogen-activated protein kinase)、WNT等等,那么淫羊藿素是如何激活这些信号级联反应尚不清楚,尤其是淫羊藿素激活上述信号通路的初始靶点一无所知。本论文以阐明信号转导途径初始事件为研究目的,本课题拟开展研究内容:1.用生物素标记淫羊藿素合成生物素化淫羊藿素;2.成骨细胞中检测合成药物的活性,并进行免疫荧光示踪;3.应用生物素/链霉亲和素亲合纯化法钓出淫羊藿素受体;4.将淫羊藿素受体及其复合蛋白质的质谱鉴定结果与文献报道和我们的前期研究相结合,推测出完整的信号转导途径;5.用阻断法验证并最终确立至少1条完整信号转导途径。研究方法:本课题首先用生物素与淫羊藿素化学合成生物素化淫羊藿素,验证合成药物活性及促进成骨细胞成熟与矿化的能力,免疫荧光示踪合成药物在成骨细胞中的分布;然后采用生物分子相互作用分析仪(Biacore),垂钓法钓取淫羊藿素受体,质谱检测分析,免疫共沉淀法和免疫荧光共定位技术验证钓取蛋白;随后阻断法检测钓取蛋白在药物发挥作用过程中的影响,确定药物在发挥其促进成骨活性过程的转导途径。研究结果表明:生物素化淫羊藿素可以成功被合成,成骨细胞验证合成药物促进细胞成熟与矿化的能力不受影响;从而可以开展后续研究,运用Biacore垂钓法钓取与生物素化淫羊藿素亲和的蛋白,质谱检测分析得到G蛋白偶联受体相关蛋白趋化因子受体4(C-X-C chemokine receptor type 4,CXCR4),阻断法研究发现,阻断CXCR4对成骨细胞的成熟与矿化有显著影响,且对BMP2-Smad1/5/9信号通路相关蛋白表达有显著影响。淫羊藿素可能通过CXCR4-BMP2-Smad1/5/9信号通路促进成骨细胞的成熟与矿化。所得结论如下:1.生物素标记法可以成功合成生物素化淫羊藿素,并保证其药物活性未丧失。2.Biacore垂钓法钓取与生物素化淫羊藿素亲和的相关蛋白,质谱检测得到G蛋白偶联受体相关蛋白(CXCR4),免疫荧光染色法成功共定位了生物素化淫羊藿素和CXCR4。3.免疫共沉淀法验证Biacore钓取结果,不同时间内CXCR4蛋白表达量,15min和30min时显著高于其他时间,BMP2也是同样的趋势。4.淫羊藿素促进骨形成可能依赖于CXCR4-BMP-Smad信号通路。阻断CXCR4,能够显著抑制成骨细胞中BMP2,p-Smad1/5/9的蛋白表达量。 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 66 |
| URL标识 | 查看原文 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.lut.edu.cn/handle/2XXMBERH/94216]  |
| 专题 | 兰州理工大学 |
| 作者单位 | 兰州理工大学 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 魏振龙. 生物素标记法钓取淫羊藿素促进骨形成受体的研究[D]. 2018. |
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