丹参（ Salvia miltiorrhiza Bunge）是我国常用的药植物，其干燥根 和）是我国常用的药植物，其干燥根 和茎称为中药丹参，在临床上广泛应用于心脑血管疾病的治疗。酚酸类物质是它 茎称为中药丹参，在临床上广泛应用于心脑血管疾病的治疗。酚酸类物质是它 茎称为中药丹参，在临床上广泛应用于心脑血管疾病的治疗。酚酸类物质是它 的药效成分之一，其合、调控直备受关注。丹酚酸源于苯丙氨途径 的药效成分之一，其合、调控直备受关注。丹酚酸源于苯丙氨途径 的药效成分之一，其合、调控直备受关注。丹酚酸源于苯丙氨途径 的药效成分之一，其合、调控直备受关注。丹酚酸源于苯丙氨途径 和酪氨酸途径，这两条上的 关键酶基因大部分已经被克隆。目前对丹酚和酪氨酸途径，这两条上的 关键酶基因大部分已经被克隆。目前对丹酚和酪氨酸途径，这两条上的 关键酶基因大部分已经被克隆。目前对丹酚调控研究也较为深入。多个参与丹酚 调控研究也较为深入。多个参与丹酚 酸类物质合成的转录因子被鉴定，然而 酸类物质合成的转录因子被鉴定，然而 从蛋白质翻译后修饰层面调控酚酸类物合成的研究，鲜有报道。泛素化作 从蛋白质翻译后修饰层面调控酚酸类物合成的研究，鲜有报道。泛素化作 从蛋白质翻译后修饰层面调控酚酸类物合成的研究，鲜有报道。泛素化作 从蛋白质翻译后修饰层面调控酚酸类物合成的研究，鲜有报道。泛素化作 为一种重要 的蛋白质翻译后修饰方式，近年来发现其在次生代谢调控中起到为一种重要 的蛋白质翻译后修饰方式，近年来发现其在次生代谢调控中起到作用。 KFB（Kelch repeat F-box）蛋白，作为 ）蛋白，作为 ）蛋白，作为 SCF型泛素连接酶的一个重要亚基， 能够识别并介导靶蛋白通过泛素 -26S蛋白酶体系统降解。一些研究发现 KFB蛋 白能够调控次生代谢物质的 合成，而丹参KFB蛋白目前尚未被研究。因此， 本研究以 KFB蛋白为切入点，探究其在酚酸类物质代谢调控中的作用。
从丹参基因组中鉴定出 31个 SmKFB基因，经过系统发育树分析现 基因，经过系统发育树分析现 基因，经过系统发育树分析现 5个 SmKFB（SmKFB1、2、3、5和 28）蛋白与已经报道参其它植物次生代谢调控 ）蛋白与已经报道参其它植物次生代谢调控 ）蛋白与已经报道参其它植物次生代谢调控 的 KFB蛋白，具有较近的亲缘关系。用茉莉酸甲酯（ Methyl jasmonate，MeJA） 对丹参的毛状根进行处理，发现 对丹参的毛状根进行处理，发现 6个 SmKFB（SmKFB1、2、5、6、11、15）表达 ）表达 量被 MeJA强烈抑制，而另外两个 强烈抑制，而另外两个 SmKFB（SmKFB22、31）则在 ）则在 MeJA诱导下， 表达量上调。组织特异性分析发现 4个 SmKFB（SmKFB4、11、16和 17） 主要在丹参的地上组织表达， 而 SmKFB5，25则主要在根中表达。结合系统发育 则主要在根中表达。结合系统发育 树分析和基因表达，推测 树分析和基因表达，推测 SmKFB1、2、5可能参与酚酸类物质的合成调控。
为验证 SmKFB1、2和 5在酚酸类物质合成中的作用， 采酵母双杂交实验在酚酸类物质合成中的作用， 采酵母双杂交实验鉴定与 SmKFB1、2和 5互作的酚酸合成酶，发现 互作的酚酸合成酶，发现 SmKFB1与丹参迷迭香酸合酶 与丹参迷迭香酸合酶 （Rosmarinic acid synthase, RAS）之间存在微弱的互作关系； SmKFB2和丹参苯 丙氨酸解酶（ 丙氨酸解酶（ Phenylalanine ammonia-lyase, PAL）1、SmPAL3、SmRAS之间也 存在微弱的互作关系；而 SmKFB5则与 SmPAL1、2、3之间存在强烈的互作关 系。采用双分子荧光互补（ Bimolecular fluorescence complementation，BiFC）实 验进一步证它们之间的互作关系。当在烟草叶片中共表达 YFPC-SmKFB5和 YFPN-SmPAL融合蛋白时，在激光共聚焦显微镜下观察不到黄色荧。将 融合蛋白时，在激光共聚焦显微镜下观察不到黄色荧。将 融合蛋白时，在激光共聚焦显微镜下观察不到黄色荧。