题名 | 人 I 型胶原蛋白基因片段的克隆及其转化乳腺上皮细胞的研究 |
作者 | 张达江 |
答辩日期 | 2007-06-15 |
授予单位 | 中国科学院研究生院 |
授予地点 | 中国科学院新疆理化技术研究所 |
导师 | 王亮 |
关键词 | 人i 型胶原蛋白 基因克隆 乳腺上皮细胞 转染 |
学位名称 | 硕士 |
学位专业 | 生物有机化学 |
英文摘要 | 近年来,随着胶原蛋白广泛应用于很多领域,国内外市场对胶原蛋白的需求量越来越大,传统的生产方法不能够满足不断增长的市场需求量,随着转基因技术的发展,利用转基因生物反应器生产胶原蛋白成为目前研究的焦点。转基因乳腺生物反应器生产诸如胶原蛋白这样的结构复杂蛋白时较目前其它的转基因生物反应器具有更大的优势,因为其生产的重组蛋白更接近其天然的结构。本实验从人胎盘基因组DNA 成功地扩增出人I 型胶原蛋白基因(COL1A1)片段,并构建其乳腺特异表达的载体,将其成功的转化了奶牛乳腺上皮细胞。首先,本实验在国内首次克隆出人I 型胶原蛋白基因片段,测序结果表明,其外显子部分与GenBank 中所公布的序列(Access NO.:AF017178)完全一致,但是在内含子部分,尤其是第一个内含子与第二个内含子与GenBank 中公布的序列有很大差异。然后,将连接上组氨酸标签的目的基因构建至乳腺特异表达载体上,与此同时将绿色荧光蛋白与新霉素抗性基因表达框构建到带有组氨酸标签的人I 型胶原乳腺特异表达载体上。最后,建立了奶牛泌乳期乳腺上皮原代细胞系,并将构建好的乳腺特异表达载体成功转染其中,这对于正确评估乳腺特异表达载体的表达效率有很大意义,并为制备高效表达重组胶原蛋白的乳腺生物反应器奠定了基础。 |
公开日期 | 2014-08-20 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.xjipc.cas.cn/handle/365002/3498] ![]() |
专题 | 新疆理化技术研究所_资源化学研究室 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 张达江. 人 I 型胶原蛋白基因片段的克隆及其转化乳腺上皮细胞的研究[D]. 中国科学院新疆理化技术研究所. 中国科学院研究生院. 2007. |
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