藤黄酸对DNA拓扑异构酶Ⅱ催化活性抑制作用的研究

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	藤黄酸对DNA拓扑异构酶Ⅱ催化活性抑制作用的研究
	秦玉新; 蒙凌华; 丁健
	2007-06-01
关键词	抑制作用细胞内靶点 GA 基因互作藤黄酸 DNA 催化活性
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英文摘要	目的:藤黄酸是从藤黄树中提取的一种酸性成分,近年来发现其具有显著的体内外抗肿瘤活性,目前由该化合物和某些碱性氨基酸组成的复方注射剂用作肿瘤的治疗已近进入临床Ⅱ的评价。但该化合物在细胞内的靶点尚不清楚,本研究通过检测藤黄酸对 DNA 拓扑异构酶的抑制作用,阐述 GA 在细胞内的靶点和可能的作用机制,从而为临床用药提供理论依据。方法: 磺酰罗丹明 B 蛋白染色法(SRB)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)评价 GA 对21 株肿瘤或正常细胞株的体外增殖抑制作用。三株多药耐药细胞株用来评价 GA 的体外抗耐药作用。DNA 拓扑异构酶Ⅰ/Ⅱ介导的 pBR322解螺旋实验和 TopoⅡ介导的 kDNA 去连环实验,检测 GA 对这两种酶活性的抑制作用。应用 DNA 拓扑异构酶Ⅰ/Ⅱ介导的 DNA 切割实验区分拓扑酶毒剂和催化抑制剂。彗星实验和 H2A．X 的磷酸化用来评价 DNA 的损伤。RNA 干扰用来确定 GA 在细胞内的靶点。Biacore 表面等离子体共振分析揭示 GA 与 Topo Ⅱ ATPase 域的的相互作用,并用虚拟分子模拟预测 GA 与 TopoⅡ的一些可能的作用位点。结果:体外增殖试验表明 GA 对各种不同组织来源的肿瘤具有广泛的细胞毒作用,并具有显著的抗多药耐药作用。GA 对 Topo Ⅰ和Ⅱ的催化活性有较强的抑制作用,但 GA 不能稳定 Topo—DNA 可切割复合物,相反 GA 可以抑制 CPT 诱导的可切割复合物的形成。在细胞水平上,GA 可以抑制 VP16诱导 DNA 损伤而引起的彗星拖尾和 H2AX 的磷酸化。用 siRNA 下调 HeLa 细胞 Topo Ⅱα表达可以显著降低 GA 诱导的细胞凋亡和 c-Jun 的磷酸化,表明 TopoⅡα是 GA 在细胞内的一个主要靶点。GA 不能嵌入 DNA 中,也不能阻碍 TopoⅡ和 DNA 的结合,但 GA 可以抑制 DNA 链转移前和转移后的 DNA 链的切割,和 ATP 的水解。Biacore 分析发现 GA 可以直接与 Topo Ⅱ ATPase 域结合。结论:GA 是一个新的 DNA 非嵌入型 TopoⅡ催化抑制剂,它能够抑制 TopoⅡ介导的 DNA 链的切割和 ATP 的水解。
会议录	2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
文献子类	Article
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267494]
专题	药理学第一研究室
作者单位	中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.
推荐引用方式 GB/T 7714	秦玉新,蒙凌华,丁健. 藤黄酸对DNA拓扑异构酶Ⅱ催化活性抑制作用的研究[C]. 见:.