酪氨酸激酶EGFR和ErbB2双重抑制剂AST-6的抗肿瘤作用以及机理研究

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	酪氨酸激酶EGFR和ErbB2双重抑制剂AST-6的抗肿瘤作用以及机理研究
	林莉萍 1; 姜勇 ; 谢华2 ; 代梅 ; 童林江 2; 任晓维 ; 郭建辉 ; 丁健2
	2009-04-09
关键词	EGFR 酪氨酸激酶 AST-6 ErbB2 抗肿瘤作用抑制剂浮选药剂机理研究
页码	2
英文摘要	研究目的:对新型喹唑啉类衍生物AST-6进行抗肿瘤作用以及机理研究,以评价其抗肿瘤活性并揭示其分子作用机理,并为AST-6实施临床试验提供临床前的实验依据。研究方法:采用ELISA法研究AST-6对多种酪氨酸激酶的抑制作用,明确AST-6的激酶抑制作用及其选择性;采用稀释法进行酶动力学检测研究AST-6在分子水平对ErbB2抑制是否具有可逆性;通过Western Blot法研究AST-6对EGFR、ErbB2以及下游信号关键分子Erk和Akt的磷酸化抑制作用;采用SRB法检测AST-6对EGFR和ErbB2表达水平不同的人肿瘤细胞以及正常细胞的增殖抑制作用;选择EGFR和ErbB2表达不同的人卵巢癌、肺癌和乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型以及HER2高表达转基因小鼠的自发性乳腺癌模型研究AST-6的选择性抗肿瘤作用。研究结果:应用ELISA法研究了AST-6在分子水平对EGFR、ErbB2等八种酪氨酸激酶的抑制活性,结果表明AST-6对EGFR和ErbB2具有显著的选择性抑制作用,其IC50分别为0.5 nM和3.0 nM,强于阳性对照药Lapatinib,而对其他6种酪氨酸激酶则无明显的抑制作用;以上结果提示,AST-6为选择性EGFR和ErbB2双重抑制剂。为进-步分析AST-6与ErbB2激酶的结合特性,采用稀释法进行了AST-6对ErbB2激酶结合的可逆性动力学分析,研究结果表明AST-6为ErbB2不可逆抑制剂,而Lapatinib为一慢解离抑制剂。选择EGFR中等程度表达、ErbB2高表达的人卵巢癌SK-OV-3细胞,研究AST-6对生长因子刺激的信号转导通路影响,结果显示AST-6在0.01μM时即显著抑制EGFR、ErbB2及其下游信号分子Erk1/2、AKT的磷酸化;与相同浓度的Lapatinib相比,AST-6作用更强;提示AST-6通过抑制EGFR与ErbB2酪氨酸激酶活性,进而下调其下游的ERK1/2-MAPK和PI3K-AKT信号转导通路,导致肿瘤细胞增殖抑制。肿瘤细胞增殖抑制研究结果表明,AST-6对人乳腺癌、肺癌、卵巢癌等不同组织来源的13株人肿瘤细胞的生长具有明显抑制作用,其中尤以对ErbB2高表达的人乳腺癌细胞BT474、人肺癌细胞Calu-3和EGFR高表达人皮肤鳞癌细胞A-431细胞的增殖抑制作用更强;AST-6对正常小鼠纤维母细胞NIH3T3的增殖无明显影响,而对ErbB2稳转高表达细胞NIH3T3/ErbB2则呈现生长增殖抑制作用;上述结果表明:AST-6对人肿瘤细胞增殖具有明显抑制作用,且这种作用对ErbB2、EGFR高表达人肿瘤细胞具有选择性抑制,而对正常细胞则无明显影响。选择ErbB2、EGFR不同表达程度的人卵巢癌、肺癌和乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型,研究AST-6的体内抗肿瘤作用,结果表明AST-6对ErbB2高表达的人卵巢癌SK-OV-3、人肺癌Calu-3裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用非常显著,在SKOV3上中高剂量(50 mg/kg,100 mg/kg)可达完全消退。其药效和耐受性明显好于阳性对照药Lapatinib;而对ErbB2不表达的人卵巢癌HO-8910、人肺癌A-549以及人乳腺癌MDA-MB-468裸小鼠皮下移植瘤则显示轻度抑制作用,但未达有效标准。为了进一步确证AST-6对ErbB2高表达肿瘤生长抑制的选择性作用,利用HER2高表达转基因小鼠的自发性乳腺癌模型研究了其对自发性乳腺癌的生长抑制作用,结果显示其对转基因小鼠自发性乳腺癌具有非常显著的生长抑制作用,该作用呈现出良好的量效关系,高剂量100 mg/kg可达完全消退,其抗肿瘤药效明显优于阳性对照药Lapatinib。研究结论:AST-6是一个具有创新化学结构的酪氨酸激酶EGFR和ErbB2双重不可逆抑制剂,其抗肿瘤作用和耐受性均明显优于已上市药物Lapatinib,为AST-6的Ⅰ类新药申报和临床研究提供了强有力的实验依据。
会议录	2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
文献子类	Article
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267389]
专题	科研与新药推进处药理学第一研究室
作者单位	1.中国科学院上海药物研究所,科研与新药推进处,上海 201203, 中国.; 2.中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.
推荐引用方式 GB/T 7714	林莉萍,姜勇,谢华,等. 酪氨酸激酶EGFR和ErbB2双重抑制剂AST-6的抗肿瘤作用以及机理研究[C]. 见:.