| 题名 | 兰州百合病毒病害初步研究及检测方法的建立 |
| 作者 | 王若愚 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-11-26 |
| 授予单位 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 |
| 授予地点 | 寒区旱区环境与工程研究所 |
| 导师 | 安黎哲 |
| 关键词 | 合无症病毒 黄瓜花叶病毒 衣壳蛋白 MALDI-Tof质谱 凝胶过滤层析 透射电镜 ELISA |
| 其他题名 | An Investigation in Viral Disease & Establishing Methods to Viral Detection of Lanzhou Lily (Lilium davidii var.unicolor) |
| 学位专业 | 生态学 |
| 中文摘要 | 兰州百合（Lilium davidii var.unicolor)系川百合（Lilium davidii Duchautre）变种，是一种球茎可食的经济作物，主要集中分布在兰州市七里河区西果园镇和西固区金沟乡一带，在兰州其他地区也有大量栽培，在区内占有重要的经济地位。近年来地产兰州百合质量波动较大，时有产品外观变小、口感变差的情况。导致因素除栽培管理不善等因素外，百合病毒感染导致植株退化是一个不可忽视的重要因素。 兰州百合的病毒病流行状况尚无系统报道，本文阐述了兰州百合的病毒感染情况，采用了分子生物学及免疫学等多种手段检测了兰州百合病毒感染状况，并对对染病植物做了初步的病理分析。研究中发现公开报道侵染的常见植物病毒：百合无症病毒(Lily symptomless virus)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus)和百合卷曲病毒（Lily mottle virus）对兰州百合都有侵染，其中LSV和CMV的感染率达到100％。本研究以兰州百合感染叶片为病毒分离材料，建立了基于两种凝胶过滤层析法和密度蔗糖梯度超离心法的LSV和CMV分离纯化方法，获得了纯化的完整LSV病毒颗粒。继而对纯化产物进行了变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，确定了其衣壳蛋白分子量大小，并对衣壳蛋白进行了MALDI-Tof 质谱分析，从多个方面证实了分离物确系LSV。随后通过反转录PCR方法，克隆了并测序了该LSV和CMV百合株衣壳蛋白基因序列，并在大肠杆菌中诱导表达了两种重组衣壳蛋白。通过在NCBI对LSV及CMV百合株病毒衣壳蛋白序列的核酸、氨基酸序列进行比对，分析了兰州百合感染LSV和CMV与世界其他地区发现的LSV及CMV之间的进化关系，建立了两种蛋白的进化树。利用本实验建立方法所得到的纯化LSV制品，及重组LSV和CMV衣壳蛋白，通过免疫家兔制备了相关病毒的高效价多克隆抗血清，并精制了异免疫球蛋白，建立了利用纯化LSV全病毒多抗作为包被抗体，抗LSV重组衣壳蛋白多抗作为酶标检测抗体的双抗体夹心法酶联免疫检测试法。同时建立了基于家兔和豚鼠多抗的CMV双抗体夹心ELISA检测法。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-08-22 |
| 页码 | 80 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.casnw.net/handle/362004/21728]  |
| 专题 | 寒区旱区环境与工程研究所_研究生学位论文_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王若愚. 兰州百合病毒病害初步研究及检测方法的建立[D]. 寒区旱区环境与工程研究所. 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所. 2008. |
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