题名 | 12C6+束和Mitomycin C 诱导的DNA损伤效应 |
作者 | 陈继栋 |
答辩日期 | 2009-07-01 |
导师 | 张红 |
关键词 | 12c6+ |
学位名称 | 硕士 |
其他题名 | DNA damage response induced by 12C6+ beam and Mitomycin C |
英文摘要 | 本文旨在分别研究重离子束及MMC在诱导细胞的DNA损伤效应中一些具体的分子机制,为治疗的进行以及相关辅助药物的开发提供理论依据。本文探索的重点有两个,第一个是重离子束辐射诱导的DNA损伤效应及p53在其中的激活,第二个是MMC诱导的DNA损伤效应及p53和BRCA1、H2AX等分子在其中的角色。 1. 12C6+离子束诱导HeLa细胞DNA损伤效应为了研究HeLa细胞经过12C6+ 束辐照之后的DNA损伤效应,及这个过程中p53激活的分子机制。我们运用中性单细胞电泳技术,检测了HeLa细胞经过4Gy 12C6+ 束辐照0h、3h、6h和12h之后DNA的损伤情况,以及0.5Gy、1Gy、2Gy和4Gy 12C6+ 束辐照0h后的DNA损伤情况。同时运用细胞生长实时监测仪监测了HeLa细胞在经过0Gy、0.5Gy和1Gy 12C6+ 束辐照之后的生长变化,并运用AO/EB双染检测了辐照24小时后的凋亡情况。另外,利用8mmol/L的caffeine(抑制ATM和ATR)和20μmol/L的wortmannin(抑制ATM和DNA-PK)处理HeLa细胞后再进行1Gy 12C6+ 束辐照,通过western blot检测p53的表达。结果显示,12C6+ 束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤,损伤随剂量升高而升高但随时间降低;并诱导HeLa细胞发生凋亡;而且辐照后p53表达升高,但经过caffeine或者wortmannin预先处理的细胞p53均没有显著升高。我们的结论是:12C6+ 束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤并诱导损伤修复及凋亡等效应,损伤效应相关的分子p53被激活,并且激活依赖于ATM。 2. MMC诱导的DNA损伤效应在这一部分研究中,首先,我们利用与上面相同的研究方法,探讨了p53在MMC诱导的DNA损伤效应中的激活情况,结果显示,MMC诱导的DNA损伤效应并不依赖于p53。另外,我们还探讨了, BRCA1在FANCD2的γ-H2AX依赖性转移中的作用。MMC可造成DNA的ICL(interstrand cross-link)损伤,ICL可通过FA(Fanconi Anemia)通路进行修复。FANCD2是FA通路的核心分子,在DNA产生ICL时被各种分子修饰然后转移到损伤部分,这个过程的涉及到ATR、γ-H2AX及BRCA1等,本文试图探讨BRCA1在其中的作用方式。研究中,我们监测了不同处理(包括对照、caffeine(可抑制ATR)、MMC及MMC +caffeine)的HCC1937(BRCA1缺陷型)和MCF7(BRCA1野生型)细胞的生长;并用Western blot检测MMC处理之后HCC1937细胞γ-H2AX的表达情况。结果表明,MMC和caffeine均可以抑制HCC1937的生长,但caffeine和MMC+caffeine的抑制效果是一样的;MMC和caffeine均可以抑制MCF7的生长,且MMC+caffeine处理比仅进行caffeine处理的抑制作用强;MMC处理之后,HCC1937的γ-H2AX表达显著升高。我们的结论是,在FANCD2的γ-H2AX依赖性转移中,H2AX的磷酸化并不依赖于BRCA1,不过,BRCA1和ATR应该参与一个相同的分子事件,可能是FANCD2的磷酸化。这个有待进一步的实验验证 |
语种 | 中文 |
学科主题 | 生物物理学 |
公开日期 | 2010-01-24 |
页码 | 44 |
分类号 | Q6 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.imp.cas.cn/handle/113462/617] ![]() |
专题 | 近代物理研究所_近代物理研究所知识存储(2010之前) |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 陈继栋. 12C6+束和Mitomycin C 诱导的DNA损伤效应[D]. 2009. |
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