南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性

	南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性
	刘秀萌 1; 李江 2; 侯旭光 1; 何培青 2
刊名	微生物学报
	2016
卷号	56 期号:9 页码:1468-1476
关键词	琼胶酶表达酶学性质新琼二糖 agarase expression enzymatic characterization neoagarobiose
ISSN号	0001-6209
英文摘要	【目的】本文通过对具有琼胶降解能力的南极菌Pseudoalteromonas sp. NJ21全基因组进行生物信息学分析,筛选获得琼胶酶疑似序列aga3311,采用基因工程手段对该基因的功能和性质进行了验证和分析。【方法】首先对aga3311进行克隆和表达;采用Ni-NTA对重组酶进行纯化;DNS-还原糖法测定重组酶的酶学性质;用薄层层析(TLC)和质谱(MS)技术对Aga3311的酶解产物进行分析。【结果】构建的重组表达质粒pET-30(a)+ aga3311能够在工程菌E. coli BL21(DE3)中实现高效表达,其中可溶性表达为30%左右;纯化的重组酶Aga3311分子量为87 kDa,其最适作用温度为35 °C,30-45 °C的范围内稳定性较高,50 °C则迅速失活,具有热不稳定的特征;最适pH为7.0,在pH 4.0-10.0的范围内仍能保持50%以上的活性;金属离子Fe~(3+)、Be~(2+)、Zn~(2+)和Ca~(2+)均能显著提高Aga3311的活性,特别是Ca~(2+)使其酶活提高1倍。该酶的酶解终产物经TLC和质谱分析主要为新琼二糖。【结论】重组酶Aga3311为Glyco_hydro_42家族的外切型beta-琼胶酶,能够特异性降解琼脂糖生成新琼二糖。
资助项目	南北极环境综合考察与评估专项 ; 国家海洋局海洋生物活性物质与现代分析技术重点实验室开放基金 ; 青岛市应用基础研究计划项目
WOS研究方向	Microbiology
语种	中文
CSCD记录号	CSCD:5784921
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.fio.com.cn/handle/2SI8HI0U/5735]
专题	自然资源部第一海洋研究所
作者单位	1.山东大学(威海)海洋学院, 威海, 山东 264200, 中国 2.山东大学(威海)海洋学院, 威海, 山东 264200, 中国 3.国家海洋局第一海洋研究所, 国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室, 青岛, 山东 266061, 中国 4.国家海洋局第一海洋研究所, 国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室, 青岛, 山东 266061, 中国
推荐引用方式 GB/T 7714	刘秀萌,李江,侯旭光,等. 南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性[J]. 微生物学报,2016,56(9):1468-1476.
APA	刘秀萌,李江,侯旭光,&何培青.(2016).南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性.微生物学报,56(9),1468-1476.
MLA	刘秀萌,et al."南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性".微生物学报 56.9(2016):1468-1476.