题名 | 白喉毒素-血管内皮生长因子突变体融合毒素的研究 |
作者 | 白向阳 |
答辩日期 | 2004 |
文献子类 | 博士 |
授予单位 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
授予地点 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
关键词 | 白喉毒素 融合蛋白 突变体 |
其他题名 | Fusion Proteins Composed of Mutant of Vascular Endothelial Growth Factor and Diphtheria Toxin |
学位专业 | 微生物学 |
英文摘要 | 本研究旨在利用突变后的血管内皮生长因子(VEGF)与白喉毒素(DT)构建靶向毒素,使其特异性地杀伤肿瘤血管,达到阻断血管增生,切断肿瘤的血液供应的目的。首先通过基因工程技术从白喉杆菌中提取基因组DNA,扩增出其中的DTC区、T区基因。并运用不同的突变方法,构建了四个VEGF的突变体。即VEGF R82A,K84A,H86A突变,VEGF D63A,E64A,E67A突变,和截去了肝素结合区和NP-l(neuropilin-l)受体结合区的VEGF R82A,K84A,H86A突变和VEGF D63A,E64A,E67A突变。以这些突变体的编码基因与DT的T区、C区基因制成四个融合基因,并在大肠杆菌中表达、纯化、复性。以相似条件下制备的不加VEGF突变体的DTT区、C区蛋白为阴性对照,以VEGFR-l+和VEGFR-2+的Lovo细胞和VEGFR-l+VEGFR-2-的SMMC-7721细胞做细胞实验。制成的四个融合毒素中有三个通过细胞学检验,具有靶向杀伤作用。特异性结合VEGFR-1受体的蛋白PmV8D、PsmVSD既可以抑制VEGFR-1+、VEGFR-2-的肝癌细胞SMMC-7721又可以抑制VEGFR-1+、VEGFR-2+的结肠癌细胞Lovo。而不带VEGF突变体的DT391无抑制作用。特异性结合VEGFRZ受体的蛋白PmV6D可以抑制VEGFR-1+、VEGFR-2+结肠癌细胞Lovo的生长,但不可以抑制VEGFR-1+,VEGFR-2-的肝癌细胞SMMC-7721。受体结合力过弱的PsmV6D不对细胞的生长产生任何影响。 |
语种 | 中文 |
公开日期 | 2010-12-15 |
页码 | 120 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/3313] |
专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 白向阳. 白喉毒素-血管内皮生长因子突变体融合毒素的研究[D]. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 2004. |
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