黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究 | |
leewh@mail.kiz.ac.cn; 李文辉*1; 王 滢2; 刘代亿3; 曾 琳1; 张 云1 | |
刊名 | 中草药 |
2018 | |
期号 | 7页码:1548-1555 |
关键词 | 黑尾胡蜂 磷脂酶a1 分离纯化 磷脂酶特异性 抗凝 |
英文摘要 |
目的 对黑尾胡蜂磷脂酶的分离方法和活性进行研究,为黑尾胡蜂的毒性机制研究和药用发掘提供实验数据。方法 通过葡聚糖凝胶 G-75 分子筛柱和肝素亲和柱对黑尾胡蜂毒液中的磷脂酶活性成分进行分离。利用质谱对目的蛋白进行肽指纹图谱分析,利用蛋白测序仪测定目的蛋白 N 末端氨基酸序列,从结构上对目的蛋白进行鉴定。利用磷脂酶 A1 检测试剂盒确认目的蛋白对底物磷脂的特异性水解位点,从活性上对目的蛋白进行鉴定。通过血浆复钙时间的测定检测目的蛋白对凝血系统的影响。结果 通过葡聚糖凝胶 G-75 分子筛柱和肝素亲和柱两步分离纯化,成功从黑尾胡蜂蜂毒中纯化到了 1 个磷脂酶活性组分。该组分在 SDS-PAGE 凝胶中表观相对分子质量约为 32 000,因此命名为 Vtp32。肽指纹图谱分析及 N 端氨基
酸序列比对结果显示 Vtp32 与 Vespa 属胡蜂磷脂酶 A1(phospholipase A1,PLA1)具有高度的序列相似性。Vtp32 可以特异性水解磷脂的 sn-1 位,因此 Vtp32 为黑尾胡蜂 PLA1。Vtp32 水解磷脂可产生溶血性凝脂,导致红细胞裂解。Vtp32 可显著延长人血浆的复钙时间,具有抗凝活性。结论 黑尾胡蜂毒液中含有大量的 PLA1,可通过葡聚糖凝胶 G-75 分子筛柱和肝素亲和柱两步分离方法进行纯化。黑尾胡蜂 PLA1 具有溶血和抗凝活性。 |
语种 | 中文 |
资助机构 | 国家自然科学基金资助项目(81373945; 31460571) ; 国家自然科学基金资助项目(81373945; 31460571) ; 国家自然科学基金资助项目(81373945; 31460571) ; 国家自然科学基金资助项目(81373945; 31460571) |
内容类型 | 期刊论文 |
源URL | [http://159.226.149.26:8080/handle/152453/12098] |
专题 | 昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学 |
通讯作者 | leewh@mail.kiz.ac.cn |
作者单位 | 1.中国科学院昆明动物研究所 2.云南民族大学民族医药学院 3.云南森林自然中心 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | leewh@mail.kiz.ac.cn,李文辉*,王 滢,等. 黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究[J]. 中草药,2018(7):1548-1555. |
APA | leewh@mail.kiz.ac.cn,李文辉*,王 滢,刘代亿,曾 琳,&张 云.(2018).黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究.中草药(7),1548-1555. |
MLA | leewh@mail.kiz.ac.cn,et al."黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究".中草药 .7(2018):1548-1555. |
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