题名 | 植物血红蛋白基因及植物凝集素基因转化水稻的研究 |
作者 | 魏国 |
答辩日期 | 1996 |
文献子类 | 硕士 |
授予单位 | 中国科学院植物研究所 |
导师 | 荆玉祥 |
关键词 | 水稻 植物蛋白 植物凝集素 血红蛋白 |
其他题名 | Plant Hemoglobin Gene and Plant Lectin Gene Transformed into Rice |
学位专业 | 植物生理学 |
英文摘要 | 植物血红蛋白在共生固氮根瘤中主要是对固氮酶进行嫌氧保护,确保固氮酶活性,在植物根中协助氧的运输或作为感觉氧压的信号分子.豆科植物凝集素功能之一是对相应专一的根瘤菌有识别作用,并有利于根瘤菌的聚集和侵染。本论文将非豆科结瘤植物Parasponia andersonii血红蛋白基因及豌豆凝集索基因转入水稻,目的是此二基因表达后,豌豆凝集素可聚集、识别豌豆根瘤菌,并有助于它们的侵染,血红蛋白则可对根瘤菌固氮酶进行嫌氧保护,保障其发挥固氮作用,从而为实现水稻结瘤和固氮打下初步基础。 本论文将带有Parasponia血红蛋白基因的pL305质粒,带有潮霉素磷酸转移酶基因及Parasponia血红蛋白基因的农杆菌双元载体质粒pLX412-Hb用花粉管通道法转化水稻l用pLX412-Hb和带有Bar基因、豌豆凝集素基因、Parasponia血红蛋白基因的质粒pLHB用基因枪法转化水稻幼胚及愈伤组织,带有pLX412-Hb的Agrobactmum tumefaciens LBA4404转化烟草,得到如下结果: 1.用pL305质粒花粉管通道法转化水稻,运作1512朵花,得到707粒种子.将230粒种子萌发,发芽220粒;白化苗4株,成苗206株;计发芽率96%,白化苗率1.7%,成苗率90%。取120株提取DNA以Parasponia血红蛋白基因为探针进行点杂交,有6株为阳性结果,阳性率5%.再取4株DNA点杂交阳性植株DNA,以Parasponia血红蛋白基因为探针进行Southem杂交,有3株有阳性结果,阳性率为75%,照此推算转化植株约占总植株的4%.目前,这些转基因植株已开花结实。 2.用pLX412-Hb质粒花粉管通道法转化水稻,运作743朵花,得到340粒种子。将120粒种子萌发,发芽117粒,白化苗3株,成苗111株;计发芽率97. 5%,白化苗率2. 5%,成苗率92. 5%.取30株提取DNA以Parasponia血红蛋白基因为探针进行点杂交,有4株为阳性结果,阳性率13%。再取4株DNA点杂交呈阳性的植株DNA,以Parasponia血红蛋白基因为探针进行Southern杂交,有2株有阳性结果,阳性率为50%,照此推算转化植株约占总植株的7%。目前部分转基因植株巳开花结实. 3.用pLX412 - Hb质粒基因枪法转化水稻幼胚及愈伤组织,抗性筛选得到15株再生植株,以Parasponia血红蛋白基因为探针进行点杂交,有14株为阳性结果,阳性率93%.取7株DNA点杂交呈阳性的植株DNA,以Parasponia血红蛋白基因为探针进行Southern杂交,都为阳性结果,阳性率为100%,照此推算转化植株约占总植株的93%.目前,部分转基因植株已开花结实. 4.用pLX412 -Hb质粒通过Agrobacterrum tumeFaciens LBA4404转化烟草,抗性筛选得到的再生植株以Parasponia血红蛋白基因为探针进行Southern杂交,结果为阳性. 5.用pLHB基因枪法转化的愈伤组织,抗性筛选得到已分化出绿芽点的愈伤组织,以Parasponia血红蛋白基因为探针或以豌豆凝集素基因为探针进行Southern杂交,杂交结果均为阳性. 6.最近国外巳发现大麦有血红蛋白基因.本论文以大麦血红蛋白cDNA为探针对未转基因的水稻进行Southern杂交,结果有阳性带。说明水稻有与大麦血红蛋白基因高度同源序列。以Parasponia血红蛋白基因为探针时杂交结果为阴性,说明水稻血红蛋白基因与Parasponiaa血红蛋白基因核苷酸序列相差较大. 7.提取Southern杂交证明有Parasponia血红蛋白基因整合的水稻根及叶总RNA,以Parasponia血红蛋白基因cDNA为探针进行RNA点杂交,结果根总RNA为阳性,叶总RNA为阴性。初步证明Parasponia血红蛋白基因在水稻根中表达。 8.提取未转基因的水稻根及叶RNA,以大麦血红蛋白基因cDNA为探针进行RNA点杂交,结果:根总RNA为阳性结果,叶总RNA为阴性结果.初步证明水稻血红蛋白基因在水稻根中表达。 总之,本论文证明已将Parasponia血红蛋白基因整合进水稻植株染色体,将豌豆凝集素基因、Parasponia血红蛋白基因整合进水稻愈伤组织染色体,初步证明水稻有血红蛋白基因,内外源血红蛋白基因都有组织特异性表达,从而为本研究的战略设想奠定初步基础。 |
语种 | 中文 |
页码 | 46 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.ibcas.ac.cn/handle/2S10CLM1/13841] ![]() |
专题 | 中科院植物分子生理学重点实验室 |
作者单位 | 中国科学院植物研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 魏国. 植物血红蛋白基因及植物凝集素基因转化水稻的研究[D]. 中国科学院植物研究所. 1996. |
个性服务 |
查看访问统计 |
相关权益政策 |
暂无数据 |
收藏/分享 |
除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。
修改评论