| 题名 | 鳜和斑鳜金属硫蛋白-2基因的克隆及表达分析 |
| 作者 | 高典 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-14 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 关键词 | 鳜 斑鳜 金属硫蛋白 基因克隆 荧光定量 免疫印迹 免疫组化 |
| 其他题名 | Cloning and expression of metallothionein-2 in the mandarin fish (Siniperca chuatsi) and spotted mandarin fish (S. scherzeri) |
| 中文摘要 | 随着工农业的发展，重金属等污染物导致的水环境污染越来越严重，分子生物标记常常被用来指示和检测水体中重金属污染状况，金属硫蛋白（Metallothionein, MT）就是其中最重要的生物标记之一。鳜（Siniperca chuatsi Basilewsky, 1855）和斑鳜（S. scherzeri Steindachner, 1892） 是我国重要的名贵淡水养殖鱼类，对水质变化非常敏感，因此，本文以这两种鱼类为材料研究了鳜和斑鳜MT-2的基因结构，并检测了鳜组织中金属硫蛋白的表达情况，用以评价其在重金属污染检测中的应用。 通过RACE-PCR技术获得了鳜MT-2基因的cDNA全长，构建了系统发育进化树，PCR扩增了鳜和斑鳜MT-2的基因组序列，并采用TAIL-PCR的方法克隆了二者MT-2的启动子区域，对MT-2进行了基因组结构分析。 鳜MT-2 cDNA序列全长为388 bp。其中5′端、3′ 端非编码区分别为49bp和156bp，开放阅读框包含183 bp，编码60个氨基酸。获得的鳜MT基因组全长为865bp，包含三个外显子和两个内含子。扩增得到的启动子长1466bp，启动子区域含有典型的顺式作用元件-金属反应元件（Metal response element, MRE），并分为三簇；含有TATA盒和激活蛋白(Activator protein1, AP1)，缺乏GC盒。 斑鳜MT-2基因组全长865bp，和鳜MT-2相比，只有外显子上少数几个碱基的差异，也包含有三个外显子和两个内含子。扩增得到的启动子长1167bp，包含的金属反应元件同样分成三簇，含有AP1和糖皮质激素应答元件(Glucocorticoid Response Element, GRE)等。 对鳜MT-2转录和表达产物的器官组织分布进行了详细的分析。real-time PCR的检测表明该基因受Cd2+诱导后，mRNA表达水平在鳃和脑组织中显著上升，在肌肉、肝脏和肾脏组织中表达水平变化不显著。构建了pET-32a(+)-MT-2原核表达质粒，通过原核表达、表达蛋白纯化，并制备多克隆抗体，对鳜的组织鳃、肝脏、心脏、肾脏、肌肉、头肾、脑、脾脏和肾脏等器官中的目的基因蛋白进行免疫印迹分析。Western blotting 结果显示，健康鳜组织中，鳃、肝脏、心脏、肾脏、肠道中MT-2表达量比较高，肌肉和脑组织中表达量比较低，头肾和脾脏中几乎检测不到MT-2的表达。对肝脏和肾脏组织进行免疫组织化学检测，在肝脏组织的染色中，MT-2分布在肝细胞的胞浆里；肾脏组织中，MT-2主要分布在肾脏近端小管和远端小管的上皮细胞胞浆内。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 118 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12390]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 高典. 鳜和斑鳜金属硫蛋白-2基因的克隆及表达分析[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
| 个性服务 |
| 查看访问统计 |
| 相关权益政策 |
| 暂无数据 |
| 收藏/分享 |
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。
修改评论