| 题名 | 银鲫卵细胞特异表达的组蛋白H2A变体及nucleophosmin的研究; Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp |
| 作者 | 吴南 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-17 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 桂建芳 |
| 关键词 | CagOH2A基因 Cag-nucleophosmin基因 Ca-nucleophosmin基因 表达模式 蛋白动力学 银鲫 彩鲫 |
| 其他题名 | Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp |
| 中文摘要 | 银鲫有着天然的雌核发育现象，这与其卵子的成分的特殊性是分不开的。本论文在实验室前期工作的基础上，着手研究银鲫成熟卵母细胞中的大量表达的两个基因——组蛋白H2A变体和nucleophosmin。本研究通过描述银鲫的卵细胞特异的组蛋白H2A变体，以及银鲫和其对照物种彩鲫的性腺特异的nucleophosmin基因的分子特征和表达模式，以及蛋白动力学等基本特征，试图从分子机理上揭示银鲫的配子发生和早期胚胎发育的特殊性。 银鲫的卵巢中有一种特殊的组蛋白H2A的变体——CagOH2A。本研究的第一方面，用序列比对和系统聚类树分析了CagOH2A和一个体细胞组蛋白 CagH2A的分子特征。第二方面从RNA和蛋白水平研究了CagOH2A在各种组织和胚胎发育过程中的时空表达模式，发现CagOH2A蛋白是仅在成体的卵巢组织中和原肠期以前的早期胚胎中存在；并用原位杂交的方法在卵巢中检测到CagOH2A的mRNA只在各种卵细胞中存在，而在周围的体细胞中不存在；所有Western blot检测到的CagOH2A蛋白的大小都暗示着其可能发生单泛素化，而更为细致的Western blot分析CagOH2A蛋白在卵子发生和成熟过程中的蛋白带型，发现在此过程中CagOH2A蛋白有可能发生某种修饰，根据哺乳类卵子发生过程中常见的组蛋白修饰，推测为甲基化。第三方面采用FRAP实验方法研究了CagOH2A蛋白在核小体中的动力学特征，并用了一种体细胞的组蛋白H2A——CagH2A作为分析的对照，揭示了CagOH2A蛋白的N/C端区域的特殊的结合性质。我们的研究结果表明CagOH2A是一个卵细胞和早期胚胎特异的组蛋白变体，其更为游离的N端可能提供了更多的修饰位点，并能轻微降低核小体的稳定性，而其紧密结合的C端保证了核小体的中心区域的稳定。 我们在银鲫和彩鲫中都克隆得到nucleophosmin/nucleoplasmin家族的一个成员，分别命名为Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin，比对了序列的同源性，并预测了磷酸化位点。还采用Western blot和免疫荧光定位的方法分析了Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin蛋白各自的表达特征，如下：在成体各组织中都是性腺特异表达，只在精巢和卵巢中检测得到，在精巢中仅在精原细胞中有强烈信号，在初级精母细胞中有微弱的信号，而在后期分化的精细胞中Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin都没有表达；在卵巢中，Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin在各种卵细胞中都有表达，但在周围的体细胞中无表达，且进一步的Western blot分析Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin在卵子发生和成熟过程中的蛋白带型，发现在此过程中二者都可能发生某种修饰，根据其他nucleophosmin/nucleoplasmin蛋白在卵子发生过程中的修饰，推测为磷酸化；在胚胎中Cag-nucleophosmin蛋白和Ca-nucleophosmin蛋白都一直存在,且蛋白带都为不变的单带。综上，它们在银鲫和彩鲫中的分子和表达特征相似，未发现显著差别。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 113 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12286]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 吴南. 银鲫卵细胞特异表达的组蛋白H2A变体及nucleophosmin的研究, Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
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