题名 | 银鲫卵细胞特异表达的组蛋白H2A变体及nucleophosmin的研究; Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp |
作者 | 吴南 |
学位类别 | 博士 |
答辩日期 | 2008-06-17 |
授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
授予地点 | 水生生物研究所 |
导师 | 桂建芳 |
关键词 | CagOH2A基因 Cag-nucleophosmin基因 Ca-nucleophosmin基因 表达模式 蛋白动力学 银鲫 彩鲫 |
其他题名 | Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp |
中文摘要 | 银鲫有着天然的雌核发育现象,这与其卵子的成分的特殊性是分不开的。本论文在实验室前期工作的基础上,着手研究银鲫成熟卵母细胞中的大量表达的两个基因——组蛋白H2A变体和nucleophosmin。本研究通过描述银鲫的卵细胞特异的组蛋白H2A变体,以及银鲫和其对照物种彩鲫的性腺特异的nucleophosmin基因的分子特征和表达模式,以及蛋白动力学等基本特征,试图从分子机理上揭示银鲫的配子发生和早期胚胎发育的特殊性。 银鲫的卵巢中有一种特殊的组蛋白H2A的变体——CagOH2A。本研究的第一方面,用序列比对和系统聚类树分析了CagOH2A和一个体细胞组蛋白 CagH2A的分子特征。第二方面从RNA和蛋白水平研究了CagOH2A在各种组织和胚胎发育过程中的时空表达模式,发现CagOH2A蛋白是仅在成体的卵巢组织中和原肠期以前的早期胚胎中存在;并用原位杂交的方法在卵巢中检测到CagOH2A的mRNA只在各种卵细胞中存在,而在周围的体细胞中不存在;所有Western blot检测到的CagOH2A蛋白的大小都暗示着其可能发生单泛素化,而更为细致的Western blot分析CagOH2A蛋白在卵子发生和成熟过程中的蛋白带型,发现在此过程中CagOH2A蛋白有可能发生某种修饰,根据哺乳类卵子发生过程中常见的组蛋白修饰,推测为甲基化。第三方面采用FRAP实验方法研究了CagOH2A蛋白在核小体中的动力学特征,并用了一种体细胞的组蛋白H2A——CagH2A作为分析的对照,揭示了CagOH2A蛋白的N/C端区域的特殊的结合性质。我们的研究结果表明CagOH2A是一个卵细胞和早期胚胎特异的组蛋白变体,其更为游离的N端可能提供了更多的修饰位点,并能轻微降低核小体的稳定性,而其紧密结合的C端保证了核小体的中心区域的稳定。 我们在银鲫和彩鲫中都克隆得到nucleophosmin/nucleoplasmin家族的一个成员,分别命名为Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin,比对了序列的同源性,并预测了磷酸化位点。还采用Western blot和免疫荧光定位的方法分析了Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin蛋白各自的表达特征,如下:在成体各组织中都是性腺特异表达,只在精巢和卵巢中检测得到,在精巢中仅在精原细胞中有强烈信号,在初级精母细胞中有微弱的信号,而在后期分化的精细胞中Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin都没有表达;在卵巢中,Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin在各种卵细胞中都有表达,但在周围的体细胞中无表达,且进一步的Western blot分析Cag-nucleophosmin和Ca-nucleophosmin在卵子发生和成熟过程中的蛋白带型,发现在此过程中二者都可能发生某种修饰,根据其他nucleophosmin/nucleoplasmin蛋白在卵子发生过程中的修饰,推测为磷酸化;在胚胎中Cag-nucleophosmin蛋白和Ca-nucleophosmin蛋白都一直存在,且蛋白带都为不变的单带。综上,它们在银鲫和彩鲫中的分子和表达特征相似,未发现显著差别。 |
语种 | 中文 |
公开日期 | 2010-11-16 |
页码 | 113 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12286] ![]() |
专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出(2009年前)_学位论文 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 吴南. 银鲫卵细胞特异表达的组蛋白H2A变体及nucleophosmin的研究, Study of Oocyte-specific Histone H2A Variant and Nucleophosmin in Gibel Carp[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
个性服务 |
查看访问统计 |
相关权益政策 |
暂无数据 |
收藏/分享 |
除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。
修改评论