| 题名 | 柱状黄杆菌强毒株特异基因的筛选及相关毒力因子的研究; The Screening of Flavobacterium columnare Virulent Strain G4 Specific DNA Sequences and Characterization of Possible Virulence Factors |
| 作者 | 李楠 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2009-01-14 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 聂品 |
| 关键词 | 柱状黄杆菌 抑制性差减杂交 毒力因子 I型限制修饰系统 电转化效率 |
| 其他题名 | The Screening of Flavobacterium columnare Virulent Strain G4 Specific DNA Sequences and Characterization of Possible Virulence Factors |
| 中文摘要 | 柱状黄杆菌是鱼类柱形病的病原，分为三种基因组型，不同基因组型的菌株致病力不同。为探明强、弱毒菌株基因组水平上的差异，以本实验室保存的分属两个不同基因组型的柱状黄杆菌G4和G18菌株为研究对象，开展毒力基因的筛选和鉴定方面的工作。分别以G4为检测子、G18为驱动子，采用抑制性差减杂交的方法，筛选到46个G4特异基因。其中，35个与已知蛋白具有同源性；分为12类，与DNA重组修复、无机离子转运代谢、外膜蛋白、肠毒素、转座酶和金属蛋白酶等功能相关。 通过扩增和分析柱状黄杆菌G4 I型限制修饰系统基因序列的全长，发现该系统含有四个基因(fclIM、fclIS、fclIR和一个功能未知的基因)；fclIM和fclIS的启动子序列和核糖体结合位点与肝素黄杆菌相似。RT-PCR证明fclIM和fclIS在G4中有明显转录。Western blotting表明，FclIM亚基分子量约为90 kD。克隆fclIM和fclIS基因全长并转化E. coli TOP10，RT-PCR证明这两个基因能正常表达。将pGL006转化含有fclIM和fclIS基因的E. coli使pGL006甲基化。经甲基化的pGL006转化G4，该G4的电转化效率提高3.6倍，从而建立了通过E. coli体内甲基化质粒以提高柱状黄杆菌电转化效率的方法。 扩增和分析TonB依赖的受体、转座酶和ABC转运超家族等基因的全长，并证明这些基因仅在柱状黄杆菌部分菌株中存在，为认识其与疾病发生的关系奠定了基础。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 104 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12226]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李楠. 柱状黄杆菌强毒株特异基因的筛选及相关毒力因子的研究, The Screening of Flavobacterium columnare Virulent Strain G4 Specific DNA Sequences and Characterization of Possible Virulence Factors[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2009. |
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