| 题名 | 应用噬菌体展示技术对对虾白斑综合症病毒（WSSV）中和抗体及感染相关蛋白的研究 |
| 作者 | 袁丽 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2006-06-17 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 戴和平 |
| 关键词 | 对虾白斑综合症病毒 (WSSV) 噬菌体展示 中和抗体 单链抗体 (scFv) 荧光定量PCR 原代细胞培养 模拟抗原表位 体外淘选 体内淘选 病毒感染相关蛋白 |
| 中文摘要 | 对虾白斑综合症自1992年爆发以来，以其传播速度快，致死率高的特点，对全世界各国的对虾养殖业造成了严重的威胁。引起该病的病原体——对虾白斑综合症病毒 (WSSV)，在分类学上已经被鉴定为一个新的病毒家族中的新种，其结构非常复杂，对其感染宿主的分子机理的研究难以借鉴已知病毒的研究结果。而且对虾细胞系尚未成功建立，这对WSSV中和抗体的筛选及感染相关蛋白的研究带来了困难。为此，本研究应用噬菌体展示技术对WSSV的中和抗体及感染相关蛋白进行了研究。 本研究以对虾淋巴原代细胞培养为基础，建立了一种高通量体外筛选中和抗体的方法。应用该方法对本实验室已获得的抗WSSV的单链抗体进行筛选，得到了一个能够阻止WSSV与对虾淋巴原代培养细胞结合的单链抗体P1D3。活体中和实验也证实该单链抗体具有一定的中和作用。由于单链抗体是在大肠杆菌中表达和制备的，能够低成本，快速地进行无限扩增，因此该单链抗体有望发展成一种具有抗病毒能力的对虾饲料添加剂。 为了完善上述已建的立体外筛选中和抗体的方法，本实验还建立了一种新的荧光定量PCR方法，对WSSV病毒粒子进行定量分析，并将该方法应用到体外筛选中和抗体的方法中。实验证明纯化的WSSV病毒悬液不需要提取DNA而可以直接作为FQ-PCR的模板进行扩增，并且能准确测定模板DNA的拷贝数，从而使该体外中和抗体筛选方法操作更为方便，也更为准确。 为研究单链抗体P1D3对应于WSSV上的抗原模拟表位，本研究以pCANTAB 5 E噬菌粒为载体，构建了较高容量的噬菌体展示随机十肽库，并用一种已知抗原的能与WSSV特异性结合的单链抗体A1对噬菌体展示随机肽库进行淘选，得到了一系列的阳性多肽序列。根据这些阳性多肽的氨基酸序列相似性比对分析，对单链抗体A1的抗原模拟表位做出了预测。随后对单链抗体P1D3也进行了相同的研究，得到了大量的阳性多肽序列，但是尚未成功得到P1D3的抗原模拟表位，这部分研究工作有待进一步深入。 本研究还优化了对活体对虾进行体内淘选和器官体外淘选的方法，并对T7噬菌体展示的WSSV cDNA文库进行了淘选，以期获得能与对虾相关器官上的细胞受体相互作用的WSSV定向靶蛋白，从而获取该病毒的感染相关基因。经过数轮的体内淘选和器官体外淘选已获得一些阳性克隆，这些阳性克隆蛋白是否确定是WSSV感染相关蛋白有待进一步的克隆和鉴定。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 142 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12126]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 袁丽. 应用噬菌体展示技术对对虾白斑综合症病毒（WSSV）中和抗体及感染相关蛋白的研究[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2006. |
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