| 题名 | KPNB1, XPO7和IPO8介导的p65入核调控以及lncRNA-P65E对p65转录活性的调控 |
| 作者 | 梁培州 |
| 答辩日期 | 2013-06-01 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 张必良 |
| 关键词 | p65 核定位序列（NLS） importin beta importin alpha lncP65E |
| 学位名称 | 理学博士 |
| 其他题名 | KPNB1, XPO7 and IPO8 Mediate the nuclear import of NF-κB/p65，and lncRNA-P65E regulates the transcriptional activity of p65 |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 英文摘要 | P65蛋白是组成NF-κB转录因子的一个重要成员，在没有激活时大部分分布在细胞浆里面。当受到环境的刺激时，NF-κB会进入细胞核执行转录功能。P65的入核受到其自身核定位序列（nuclear localization signal (NLS)）的调控，但是p65的如何如何受importin家族的调控目前还有一些争议。利用RNAi高内涵筛选（HCS），我们鉴定出3个importin β负责p65的入核转运。当细胞受到TNF刺激时，沉默KPNB1，XPO7，IPO8这三个importin β减少p65的细胞核聚集，从而降低NF-κB的转录活性。KPNB1，XPO7和IPO8能直接跟p65复合体相互作用。其中，KPNB1是最主要的p65入核受体，依赖KPNA2以及p65自身的核定位序列。但是我们发现突变后的p65仍然能够进入细胞核，并且XPO7和IPO8与p65的相互作用不依赖p65的NLS。六个importin ɑ对p65入核产生或多或少的影响，但是起主要作用的importin ɑ为KPNA2。这表明p65的入核通路主要是经典的KPNA2/KPNB1受体介导的，p65也会利用旁路途径进入细胞核。总之，importin β家族在p65的转位调控起着重要的作用，这将增加我们对p65调控机制的深入了解。 lncRNA（long non-coding RNA）是长度大于200个碱基，不编码蛋白质的单链RNA。lncRNA具有多种多样的作用方式，在生物体的各种生命活动中起着重要的调控作用，lncRNA跟各种疾病也有着密切的关联。我们从前人p65 chip-seq的数据分析有可能受NF-κB p65调控的lncRNA，然后用定量PCR进行验证。我们发现lncRNA-P65E（lncP65E，NR_034124）受到TNF刺激时表达量下调。排除lncP65E的编码可能性后，我们发现lncP65E影响NF-κB的转录活性。利用共表达网络进行靶点预测以及后续的实验证实，lncP65E能够上调ALPL以及下调CTSL基因的表达。ALPL蛋白能够跟NIK，TRAF2和TRAF3结合，抑制NF-κB通路的激活，从而抑制NF-κB的转录活性。lncP65E也许通过募集DNA修饰的蛋白酶调节ALPL的表达，从而负反馈调控NF-κB的活性。这些数据表明，NF-κB可以通过非编码RNA间接地负反馈调控其自身的活性。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 页码 | 106 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/1008]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 梁培州. KPNB1, XPO7和IPO8介导的p65入核调控以及lncRNA-P65E对p65转录活性的调控[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2013. |
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