| 题名 | 基于G-四聚体和杂交链式反应的核酸放大检测方法 |
| 作者 | 董娟 |
| 答辩日期 | 2013-05 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 唐卓 |
| 关键词 | 核酸检测 G-四聚体 杂交链式反应 电化学dna放大传感器 Gq-hcr Ec-hcr |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 核酸是一切生命体的遗传基础。随着核酸研究工作的不断深入，人们发现许多重大疾病都与核酸有着密切联系。因此，建立经济高效、灵敏准确的核酸检测技术有着非常重要的意义。目前，核酸放大检测技术的研究成果层出不穷，但普遍都需要蛋白酶参与，成本高昂。杂交链式反应（HCR）是一种仅依靠一对交叉互补的寡核苷酸发夹探针便可对目标核酸进行放大检测的方法，不仅不依赖蛋白酶，而且在常温条件下即可工作。G-四聚体是一段非常巧妙的、多功能的富G核酸序列，因其具有的适体特性及过氧化物酶活性能够使信号底物产生颜色、荧光等多种信号而被广泛用作核酸检测技术的信号报告分子。本论文所涉及的工作即是以G-四聚体和杂交链式反应为基础展开的，致力于开发经济高效的核酸放大检测技术。论文分两部分对相关研究工作进行了介绍。第一部分工作是基于G-四聚体和杂交链式反应建立了一种溶液体系中的核酸放大检测方法，主要内容及结果如下：1.采用三种策略进行探针设计，最终确立了以完整的G-四聚体序列CatG4插入HCR探针的新探针结构，并建立了全新的GQ-HCR核酸放大检测体系；2.利用GQ-HCR对单链核酸进行了检测，通过比色（LD=7.5nM）和荧光（LD=4nM）两种方式对检测结果进行了报告；3.与PCR相结合，利用GQ-HCR对双链核酸进行检测，最低可检测到5个拷贝左右的目标核酸分子；4.尝试GQ-HCR方法可视芯片化，具有非常好的重现性和准确性；5.对GQ-HCR和PCR+GQ-HCR方法均进行了特异性评价，可区分低至一个碱基的突变，具有非常好的特异性。第二部分工作是在第一部分工作的基础上展开的，是将GQ-HCR与电化学检测相结合进行新型电化学DNA放大传感器的建立。传感器的初始设计策略是直接将GQ-HCR探针中对目标核酸起识别作用的发夹探针GA1自组装在电极表面来对目标核酸进行检测。研究结果显示，自组装在电极表面的探针GA1无法与目标分子结合，从而无法对目标分子进行检测。导致该方案失败的原因可能是由于GA1是发夹型探针，自组装在电极表面后对目标分子与探针的结合造成了巨大的空间位阻。因此，我们提出了基于直链探针的电化学DNA放大传感器设计方案，相关研究工作正待开展。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 产权排序 | 1 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28796]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 董娟. 基于G-四聚体和杂交链式反应的核酸放大检测方法[D]. 中国科学院大学. 2013. |
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