Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能

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	Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能
	陈奇; 秦湘静; 李青连; 鞠建华
刊名	微生物学报
	2017
卷号	57 期号:07 页码:1095-1105
关键词	marinacarboline 甲基化生物合成酶反应
通讯作者	陈奇
中文摘要	【目的】定位Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652基因组中负责marinacarbolines甲基化修饰的基因mcbD并鉴定其功能。【方法】游离M.thermotolerans SCSIO 00652的基因组序列中功能注释为甲基转移酶的蛋白,使用MEGA 6自带的ClustalW与来自于marformycins生物合成途径中的Mfn G(D/L-酪氨酸甲基化酶)进行多序列比对,用邻接法(Neighbor-Joining)构建系统进化树,筛选到与MfnG进化关系最近的Orf03255(Mcb D);扩增mcbD后克隆至pET28a(+)并在E.coli BL21(DE3)中表达,结合Ni-NTA亲和层析法纯化获取较高纯度的McbD活性蛋白;以marinacarboline B为底物,利用高效液相色谱检测McbD的体外酶活;利用基于PCR-targeting的遗传操作体系构建mcb D插入失活突变株((35)mcbD)并分析其与野生型菌株的发酵产物差异。【结果】N-末端融合组氨酸标签的McbD蛋白在E.coli BL21(DE3)中可溶性表达,亲和层析纯化的McbD能够以marinacarboline B为底物催化形成marinacarboline C;mcbD基因阻断突变株ΔmcbD与野生型相比不产生化合物marinacarboline C,同时累积marinacarboline B。【结论】McbD为marinacarbolines生物合成中必需的O-甲基转移酶。
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17353]
专题	南海海洋研究所_中科院海洋生物资源可持续利用重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	陈奇,秦湘静,李青连,等. Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能[J]. 微生物学报,2017,57(07):1095-1105.
APA	陈奇,秦湘静,李青连,&鞠建华.(2017).Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能.微生物学报,57(07),1095-1105.
MLA	陈奇,et al."Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能".微生物学报 57.07(2017):1095-1105.