沉默ILK基因的稳定转染细胞株的构建与鉴定

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	沉默ILK基因的稳定转染细胞株的构建与鉴定
	薛金才; 关泉林; 王千千; 王玉凤; 于涛; 丁方回; 何等旗
刊名	现代口腔医学杂志
	2015
卷号	29 期号:1 页码:7-11
关键词	ILK RNA干扰舌鳞癌基因表达
英文摘要	目的研究整合素连接激酶(ILK)在细胞中的功能,构建ILK基因shRNA慢病毒载体,并对其在舌鳞癌细胞株Tca-8113中沉默效果进行鉴定。方法针对ILK基因有效靶序列的3个位点,设计合成3对oligo DNA,退火形成双链DNA,与线性化pENTR/U6载体连接产生shILK-LV慢病毒载体,筛选出阳性克隆测序鉴定,用shILK-LV载体、包装质粒Packaging Mix共转染293T包装细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达数目测定病毒滴度并确定恰当的MOI值。获得重组慢病毒后感染人舌鳞癌细胞株Tca-8113,用qPCR及Western blot检测ILK在 Tca-8113细胞中的表达。结果测序证实成功构建了3个ILK-shRNA慢病毒载体,分别转染Tca-8113细胞后用sybr法检测出shRNA-ILK-370组ILK的表达明显下降,ΔΔCt值为0.268。用shRNA-ILK-370慢病毒载体包装病毒,测定病毒滴度,并得出当MOI=30-60时,细胞阳性比率最高。用病毒感染Tca-8113细胞后再用抗生素筛选稳转株,后用qPCR检测干扰效率达90.5%,Western blot检测ILK表达明显被抑制。结论成功构建shILK-LV慢病毒载体并建立了稳定的 Tca-8113-shILK细胞模型,为研究ILK在舌鳞癌信号转导通路中的作用提供了坚实基础。
资助项目	甘肃省卫生厅资助项目
项目编号	甘肃省卫生厅卫生行业科研计划资助项目
语种	中文
CSCD记录号	CSCD:5344028
资助机构	GSPHD
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.lzu.edu.cn/handle/262010/186972]
专题	第一临床医学院_期刊论文
推荐引用方式 GB/T 7714	薛金才,关泉林,王千千,等. 沉默ILK基因的稳定转染细胞株的构建与鉴定[J]. 现代口腔医学杂志,2015,29(1):7-11.
APA	薛金才.,关泉林.,王千千.,王玉凤.,于涛.,...&何等旗.(2015).沉默ILK基因的稳定转染细胞株的构建与鉴定.现代口腔医学杂志,29(1),7-11.
MLA	薛金才,et al."沉默ILK基因的稳定转染细胞株的构建与鉴定".现代口腔医学杂志 29.1(2015):7-11.