粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定

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	粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定
	蔡成郁 ; 白羽 ; 刘志刚 ; 吉坤美
刊名	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZJSB200701005&dbname=CJFQ2007
	2012-04-27 ; 2012-04-27
关键词	粉尘螨 Der f 3 变应原原核表达鉴定
中文摘要	目的克隆表达粉尘螨3类变应原(Der f 3)基因,并鉴定纯化蛋白的变应原性。方法取华南地区采集经实验室培养的粉尘螨(约500只)提取总RNA,经RT-PCR扩增Der f 3基因。将目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-Der f 3。大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,表达Der f 3目的蛋白。重组rDer f 3蛋白经6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析该纯化Der f 3蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE反应性,以鉴定重组Der f 3的变应原性。结果以粉尘螨总RNA为模板克隆出Der f3基因,该基因与GenBank (D63858)公布的Der f3比较有4个核苷酸差异,但同源性为99.5%。E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后高效表达Der f 3重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经Western blotting分析该重组蛋白Der f 3能与粉尘螨过敏患者血清的IgE反应,而不与健康者血清IgE反应。结论构建了华南地区粉尘螨3类变应原的原核表达载体,并高效表达和纯化出具变应原性的Der f3重组蛋白。
语种	中文
其他责任者	深圳大学过敏反应与免疫学研究所 ; 深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060 ; 深圳518060
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/244041/1040]
专题	深圳大学
推荐引用方式 GB/T 7714	蔡成郁,白羽,刘志刚,等. 粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定[J]. http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZJSB200701005&dbname=CJFQ2007,2012, 2012.
APA	蔡成郁,白羽,刘志刚,&吉坤美.(2012).粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定.http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZJSB200701005&dbname=CJFQ2007.
MLA	蔡成郁,et al."粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定".http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZJSB200701005&dbname=CJFQ2007 (2012).