木霉菌蛋白诱导玉米抗弯孢菌叶斑病的初步研究

CORC > 上海交通大学

	木霉菌蛋白诱导玉米抗弯孢菌叶斑病的初步研究
	唐俊 ; 傅科鹤 ; 高永东 ; 孙文良 ; 陈捷
	2012-04-24 ; 2012-04-24
会议名称	中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会
关键词	木霉菌激发蛋白限制性内切酶介导的基因整合技术诱导抗性
中文摘要	木霉菌是一类重要的农作物病害的生防真菌,其中诱导抗性是重要生物防治机制之一。木霉菌产生的激发蛋白已证明是木霉菌诱导抗性的重要因子。本研究通过限制性内切酶介导的整合技术 (REMI,restriction enzyme-mediated integration),以野生菌 T23为出发菌株,制备原生质体,在限制性内切酶 HindⅢ的介导下,将线性质粒 pV2插入到木霉基因组中,创建了木霉菌突变体库。通过离体叶片法,从240株木霉菌 REMI 突变体中,成功筛选出具有诱导抗玉米弯孢菌叶斑病的激发子蛋白。具体过程如下:利用60%饱和度的硫酸铵沉淀木霉发酵液蛋白,离心后收集沉淀,用 PBS 缓冲液溶解沉淀的蛋白,透析袋透析去除残余的硫酸铵。将透析后的蛋白液通过 Bradford 法进行定量,并依次稀释为2 μg/ml,10μg/ml,50μg/ml,100μg/ml。然后将生长状态一致的离体玉米叶片(万糯六号) 浸到一系列浓度梯度的蛋白液中,并抽真空3h,将培养皿垫两层湿润的滤纸,玉米叶片平铺到滤纸上,两端用湿棉球保湿,随后在每片叶片上接上直径为4mm 的玉米弯孢叶斑病菌菌饼,以水杨酸(浓度分别为0.1 mmol/L,0.5 mmol/L,1 mmol/L,2 mmol/L,5 mmol/L)、PBS 溶液和水处理为对照, 28℃保湿48h 后,调查病斑病大小。结果表明,与对照相比,浓度为10μg/ml 的大多数菌株发酵液蛋白可诱导离体叶片产生明显的抗性,与水和水杨酸处理相比,离体叶被激发蛋白处理后玉米叶片水浸状病斑面积减少30%～50%,症状明显减轻。本方法为高通量、快速地筛选木霉菌高效抗性激活蛋白提供了新途径。关于激发子蛋白的性质正在深入研究。
会议录	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=GDKL200807001271&dbname=CPFD2008
会议录出版者	中国农业科学技术出版社
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/231030/695]
专题	上海交通大学
推荐引用方式 GB/T 7714	唐俊,傅科鹤,高永东,等. 木霉菌蛋白诱导玉米抗弯孢菌叶斑病的初步研究[C]. 见:中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会.