玉米弯孢叶斑病菌突变体库构建及毒素合成相关基因的克隆

CORC > 上海交通大学

	玉米弯孢叶斑病菌突变体库构建及毒素合成相关基因的克隆
	刘铜 ; 刘力行 ; 黄秀丽 ; 姜雪 ; 周菲红 ; 陈捷
	2012-04-24 ; 2012-04-24
会议名称	中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会
关键词	玉米弯孢叶斑病菌突变体毒素 ATMT 基因克隆
中文摘要	玉米弯孢叶斑病菌已知可在离体和活体条件下产生毒素,但关于该病菌产生毒素相关基因的研究至今未见报道,在分子水平上揭示病菌产生毒素的分子机理对于全面认识玉米弯孢叶斑病菌的致病机理具有重要意义。本研究通过农杆菌介导转化技术(ATMT)创造致病缺陷性突变体,建立突变体库,然后克隆病菌产毒相关基因。目前成功采用玻片悬浮法培养弯孢菌萌发孢子进行 ATMT 转化, 建立了弯孢病菌高效的遗传转化体系。研究中发现采用 AGL-1/pBHt1双元载体,以萌发6h 的孢子为材料,在25℃共转化48h 为最佳遗传转化体系,使转化效率达到0.1%。通过 ATMT 法建立了一个>3000 T-DNA 插入的弯孢菌突变体库,对转化子进行了抗性基因潮霉素基因扩增和 Southern blot 拷贝数分析,发现90%的转化子以 T-DNA 单拷贝插入真菌基因组中。根据突变体库中的转化子在生长速度、色素变化,产孢水平和产毒素能力的变化,筛选不同类型的缺陷性突变体,获得2个在生长速度、14 个在色素形成、1个在产孢能力和7个在产毒素水平上发生变化的突变体。同时建立了以 TAIL-PCR 和反向 PCR 技术对转化子 T-DNA 两翼序列进行了分析体系。目前通过 TAIL-PCR 和反向 PCR 技术获得1个与生长速度、9个与色素形成和2个与产毒能力有关的突变体侧翼序列,将利用 RACE 技术克隆与毒素合成相关基因。
会议录	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=GDKL200807001054&dbname=CPFD2008
会议录出版者	中国农业科学技术出版社
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/231030/692]
专题	上海交通大学
推荐引用方式 GB/T 7714	刘铜,刘力行,黄秀丽,等. 玉米弯孢叶斑病菌突变体库构建及毒素合成相关基因的克隆[C]. 见:中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会.