人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

	人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
	吕卫东; 俊鑫; 刘绿艳; 李欣; 崔璐璐; 万晓春
刊名	中国医药生物技术
	2014
英文摘要	目的：制备抗人 OX40单克隆抗体，为进一步研究OX40/OX40L 通路以及针对该通路进行疾病干预、疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法 PCR扩增人 OX40胞外区的基因序列，将其构建到原核表达载体 pET-32a(+)中，利用大肠杆菌表达系统表达OX40胞外区蛋白，经 Ni 柱纯化后获得目的蛋白。以纯化的 OX40胞外区蛋白为免疫原免疫小鼠，采用常规方法进行细胞融合，通过 ELISA 和多次克隆化培养，筛选出分泌特异性鼠抗人 OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot 和免疫荧光检测抗体的效价及特异性。结果成功构建人 OX40原核表达质粒 pET-32a(+)-OX40，并在 BL21(DE3)中诱导表达，经 SDS-PAGE 和 Western blot 鉴定、Ni 柱纯化、透析后获得 OX40胞外区蛋白；以此纯化蛋白为免疫原，成功制备具有较强亲和力的单克隆抗体。结论克隆表达并纯化了人 OX40蛋白，成功制备针对该蛋白的高亲和力单克隆抗体，为进一步研究 OX40/OX40L的生物学功能奠定了实验基础。
收录类别	其他
原文出处	http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgyyswjs201404013.aspx
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.siat.ac.cn:8080/handle/172644/6086]
专题	深圳先进技术研究院_医药所
作者单位	中国医药生物技术
推荐引用方式 GB/T 7714	吕卫东,俊鑫,刘绿艳,等. 人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备[J]. 中国医药生物技术,2014.
APA	吕卫东,俊鑫,刘绿艳,李欣,崔璐璐,&万晓春.(2014).人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备.中国医药生物技术.
MLA	吕卫东,et al."人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备".中国医药生物技术 (2014).