Bm-TFF2在毕赤酵母中的表达及鉴定

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	Bm-TFF2在毕赤酵母中的表达及鉴定
	余果宇 1,2; 张红芸 3; 张勇 1; 江萍 1; 李文辉 1; 张云[*]1
刊名	动物学研究
	2010
卷号	31 期号:6 页码:565-569
关键词	Bm-TFF2 毕赤酵母表达鉴定
其他题名	Expression and identification of Bm-TFF2 in Pichia pastoris
通讯作者	zhangy@mail.kiz.ac.cn
中文摘要	Bm-TFF2,一种从大蹼铃蟾皮肤分泌物中分离得到的两栖类三叶因子,具有比人三叶因子更强的生物学活性。该研究以Bm-TFF2的cDNA为模板,利用PCR方法扩增Bm-TFF2基因,然后插到含有AOX1启动子和α-因子信号肽序列的表达载体pPIC9K中,采用毕赤酵母表达系统进行分泌表达,并用G418筛选高拷贝整合转化子。SDS-PAGE和Western blotting都检测到Bm-TFF2被分泌性表达于酵母上清。在1%的甲醇诱导表达不同时间后,重组蛋白在72h的表达量最大,可达50mg/L;而不同浓度的饱和硫酸铵沉淀菌液上清时,80%的饱和硫酸铵沉淀量最大。这些结果表明,重组质粒Bm-TFF2-pPIC9K成功构建并在真核细胞中高效表达,这为进一步研究Bm-TFF2的生物学活性及其结构与功能关系奠定了基础
英文摘要	Bm-TFF2, an amphibian trefoil factor, which is isolated from skin secretions of frog Bombina maxima, has much stronger biological activities than human TFFs. In the present study, Bm-TFF2 gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from its cDNA and cloned into Pichia pastoris expression vector pPIC9K containing AOX1 promoter and α-factor leader sequence. Multi-copies insertion transformants were screened on G418 plates. After the induction by 1% methanol for 72 hours, the expression of Bm-TFF2 came up to the best quantity which was about 50 mg in 1L medium, and 80% saturation ammonium sulfate was suitable to collect the Bm-TFF2 protein, as identified by SDS-PAGE and Western blotting assay. The results showed that the plasmid of Bm-TFF2-pPIC9K was constructed successfully and expressed abundantly in eukaryotic expression system, which lies basis for researching further the biological activities and the relationship of structure and functions of Bm-TFF2.
收录类别	其他
资助信息	“973”项目(2010CB529805);国家基金委重点项目(30630014);国家基金委面上项目(30570359);中国科学院重要方向项目(KSCX2-YW-R-088).
语种	中文
公开日期	2011-08-22
内容类型	期刊论文
源URL	[http://159.226.149.42:8088/handle/353002/6670]
专题	昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学昆明动物研究所_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室
作者单位	1.中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室, 云南昆明 650223 2.昆明医学院生物化学教研室, 云南昆明 650500 3.昆明医学院第一附属医院妇产科, 云南昆明 650032
推荐引用方式 GB/T 7714	余果宇,张红芸,张勇,等. Bm-TFF2在毕赤酵母中的表达及鉴定[J]. 动物学研究,2010,31(6):565-569.
APA	余果宇,张红芸,张勇,江萍,李文辉,&张云[*].(2010).Bm-TFF2在毕赤酵母中的表达及鉴定.动物学研究,31(6),565-569.
MLA	余果宇,et al."Bm-TFF2在毕赤酵母中的表达及鉴定".动物学研究 31.6(2010):565-569.