竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较

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	竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较
	李文辉; 高荣; 张云[*]
刊名	动物学研究
	2003
卷号	24 期号:3 页码:180-185
关键词	蛇毒丝氨酸蛋白酶序列底物专一性
ISSN号	0254-5853
其他题名	Molecular Cloning and Sequence Comparison of Serine Proteases from the Venom of Trimeresurus stejnegeri
通讯作者	zhangy@mail.kiz.ac.cn
中文摘要	利用逆转录酶与聚合酶链反应相结合的 RT-PCR 法, 扩增出5个竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒丝氨酸蛋白酶的 cDNAs; 将扩增的 cDNA 片段克隆入 pGEM-T 载体中, 筛选得到它们的基因, 分别命名为TSSP-1、TSSP-2、TSSP-3、TSSP-4 和 TSSP-5. 经末端终止法测定核苷酸序列, 推导出5个丝氨酸蛋白酶的全序列; 结合纯化的蛋白酶N-末端序列测定结果, 推导 TSSP 2、3和4分别编码凝血酶样酶 stejnobin、纤溶酶 stejnefibrase 1和2. 5个丝氨酸蛋白酶分别含有1～6个N-型糖基结合位点, 表明它们的计算分子量与纯化蛋白表观分子量之间的差异是由糖含量的不同造成, 而其氨基酸序列相似度在60%-90%, TSSP-1 和-2编码的成熟蛋白酶山236个氨基酸残基组成, TSSP-3, -4 和 -5的则山234个氨基酸残基组成, TSSP-1编码的蛋白酶在组成丝氨酸蛋白酶三联体催化活性中心产生了 His~(41)-Arg~(41)的在然突变, 这与其他自然界发现的丝氨酸蛋白酶明显不同。
英文摘要	Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT 2 PCR) was employed to amplify cDNAs constructed from Trimeresurus stejnegeri venom glands poly (A) + RNA to facilitate the cloning and sequencing of serine protease genes. The PCR products were then subcloned into pGEM 2 T vector and transformed into E 1 coli strain JM109. Five ser 2 ine protease cDNAs (named TSSP 2 1 , 2 2 , 2 3 , 2 4 and 2 5 , respectively) were cloned and sequenced. The protease encod 2 ed by TSSP 2 1 is characterized by a His 41 2 Arg 41 mutation in the catalytic triad. Combined the results of N 2 terminal se 2 quence determinations of the purified proteins , it is concluded that TSSP 2 2 , 2 3 and 2 4 encode stejnobin (thrombin 2 like enzyme) , and stejnefibrase 1 and 2 (fibrinolytic enzymes) , respectively. Mature proteases encoded by TSSP 2 1 and 2 2 are composed of 236 amino acid residues , and those proteases encoded by TSSP 2 3 , 2 4 and 2 5 are all composed of 234 amino acid residues. The cloned 5 mature proteases contain 1 to 6 N 2 type glycosylation sites , indicating that the differ 2 ences among calculated molecular weights and apparent molecular weights determined by SDS 2 PAGE are caused by carbo 2 hydrate content variations. Sequence identities among the cloned proteases are around 60 % - 90 %. The differences in their structures resulted in their various substrate specificities.
收录类别	其他
资助信息	云南省自然科学基金资助项目 ( 99C0 0 85M);中国科学院西部之光项目;中国科学院“十五”计划预研项目
原文出处	2003243180.pdf
语种	中文
公开日期	2010-08-24
内容类型	期刊论文
源URL	[http://159.226.149.42:8088/handle/152453/1999]
专题	昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学
作者单位	中国科学院昆明动物研究所,昆明650223
推荐引用方式 GB/T 7714	李文辉,高荣,张云[*]. 竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较[J]. 动物学研究,2003,24(3):180-185.
APA	李文辉,高荣,&张云[*].(2003).竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较.动物学研究,24(3),180-185.
MLA	李文辉,et al."竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较".动物学研究 24.3(2003):180-185.