短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析

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	短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析
	孙靖然 ; 刘长宁 ; 李荣贵 ; 张伟 ; 李盛英
刊名	青岛大学学报(工程技术版)
	2016
期号	2
关键词	短密青霉异戊烯基转移酶丝状真菌 DMAPP 功能分析
中文摘要	在对丝状真菌短密青霉(penicillium brevicompactum NRRL 864)的全基因组进行分析时,发现该真菌可能表达一种异戊烯基转移酶PbPT。通过反转录RT-PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)获得真菌cDNA,并以cDNA为模版,将编码PbPT的开放阅读框克隆到pET-28b构建表达载体pET28b-PbPT,将pET28b-PbPT转化Escherichia coli BL21(DE3)获得表达菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导高效表达PbPT,利用Ni-NTA树脂亲和纯化重组PbPT活性蛋白,并对该蛋白进行了底物特异性分析、产物结构鉴定以及酶促动力学分析。分析结果表明,以二甲基丙烯基二磷酸(dimethylallyl pyrophosphate,DMAPP)为供体,PbPT特异性催化异戊烯基转移至Brevianamide F的α位C上,生成Deoxybrevianamide E。Brevianamide F是合成真菌生物碱类杀虫抗生素brevianamides的重要中间体,真菌吲哚类异戊烯基转移酶家族新成员PbPT的发现。该研究为进一步寻找和阐明真菌生物碱类杀虫抗生素brevianamides的生物合成基因簇和合成途径奠定了基础。
公开日期	2016-07-06
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.xtbg.org.cn/handle/353005/9916]
专题	西双版纳热带植物园_2012年后新成立研究组
推荐引用方式 GB/T 7714	孙靖然,刘长宁,李荣贵,等. 短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析[J]. 青岛大学学报(工程技术版),2016(2).
APA	孙靖然,刘长宁,李荣贵,张伟,&李盛英.(2016).短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析.青岛大学学报(工程技术版)(2).
MLA	孙靖然,et al."短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析".青岛大学学报(工程技术版) .2(2016).