题名 | 海藻糖合成酶基因克隆及其在烟草中的转化 |
作者 | 陈红漫 |
学位类别 | 博士 |
答辩日期 | 1999 |
授予单位 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
授予地点 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
关键词 | 海藻糖-6-磷酸合成酶 基因克隆 海藻糖 转化 |
学位专业 | 微生物学 |
中文摘要 | 海藻糖-6-磷酸合成酶是酵母菌中海藻糖合成的关键酶。本项研究成功地将酵母海藻糖-6-磷酸合成酶的基因转到模式植物烟草中,上株试验表明抗逆效果良好。从筛选出的高产海藻糖酵母菌株AS2.1416中提取总RNA,分离纯化得到mRNA,在逆转录酶的作用下合成互补的cDNA。设计引物S_1P_1,S_2P_2,以cDNA为模板,通过PCR反应,扩增出约1.6kb和2.6kb大小的两个目的基因片段。即海藻糖-6-磷酸合成酶(tps1)和海藻糖磷酸酯酶(tps2)基因片段。将tps1、tps2基因克隆,并对tps1基因全序列进行分析发现,克隆片段全长15076bps,含有一个1485bps的ORF,可编码由495个氨基酸组成的蛋白质。与国外已发表的序列相比较,编码区核苷酸序列同源性为99.6%。成功地构建了携带tps1基因的植物表达载体将其转化农杆菌,以该农杆菌浸染植物叶片,利用叶盘转化法获得了转基因烟草植株。通过Southern杂交分析证明tps1基因已整合到植物染色体上;通过Northern杂交分析证明tps1基因在植物细胞内已正常转录。对基因表达产物检测结果显示每克(干重)转基因烟草叶片内海藻糖含量最高可达0.27%。对转基因植株进行上株实验,电镜观察显示,在遭受冷胁迫和冻胁迫后,转基因烟草较对照植株受伤害程度明显减弱,特别是对叶片细胞内叶绿体,线粒体等细胞器的膜结构保护作用较好。 |
语种 | 中文 |
公开日期 | 2010-12-15 ; 2011-04-29 |
页码 | 76 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/3071] ![]() |
专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所_学位论文 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 陈红漫. 海藻糖合成酶基因克隆及其在烟草中的转化[D]. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 1999. |
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