| 题名 | 硕士论文-紫膜表面电位及蛋白质构象的荧光探针研究 |
| 作者 | 生文君 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 1989 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 冼鼎昌 |
| 关键词 | 紫膜表面电位 蛋白质 荧光探针 |
| 学位专业 | 高能物理 |
| 中文摘要 | 本文用荧光探针ANS分析测量了介质pH对紫膜表面电位的影响。通过对紫膜碎片的测量可以知道，当紫膜处于非能化状态时，在酸性区域，膜表面电位随pH的增高而很快增高，在pH>5.5以后表面电位基本不变；处于能化态下的紫膜碎片在介质pH小于8.50时的膜表面电位与非能化态时的基本一致，但在pH9左右与非能化态时相比有一明显的增高，表明此时表面电荷的分布可能有较大的变化。进一步分析了含三体bR的大豆磷脂囊泡的表面电位与pH的依赖关系，发现与紫膜碎片相比，变化规律极其相似，但在酸性部分表面电位的变化幅度大于碎片的，这可能是因为bR的C端所处的表面受pH的影响更大的缘故；并且当大豆磷脂囊泡中的bR处于能化态时，结合在囊泡上的ANS的荧光强度比bR处于非能化态时的大很多。在对含单体bR的DMPC囊泡进行测量时，发现其膜表面电位随pH的增高而增高，表明bR的N端受pH的影响与C端不同。为了探讨膜表面电位与其质子泵功能的关系，将bR重组后用pH计对其进行测量。用大豆磷脂将bR重组成囊泡后测量其质子泵功能，结果表明，其质子泵方向与天然嗜盐菌细胞的相反。在bR光化循环过程中溶液中的H~+浓度的变化因介质pH的不同而变化很大，在pH6.5的构象可能有较大变化。这一结果与上面膜表面电位的测量结果是一致的。在测量用DMPC重组的单体bR囊泡的质子泵功能时，发现与天然嗜盐菌细胞的质子泵方向相同，表明在此囊泡中的bR的N端处于囊泡的外表面。用荧光探针和MC540与紫膜结合，通过在不同介质pH下测量探针的荧光寿命，对bR的构象变化做了分析。结果表明，嵌入紫膜碎片中的ANS的荧光寿命在pH4 ～ 11范围内随介质pH的增高而呈U字形变化，在大豆磷脂囊泡和DMPC囊泡中也有类似情况，但分别在pH9.2和pH6.7处出现极点，说明在酸性或碱性较强的介质中，bR的构象变化较大。在ANS与两种囊泡样品结合后，明显观察到ANS的荧光寿命中含有两个衰减成分，并且随着介质pH的变化，这两种成分的含量也有相应的变化；ANS与紫膜碎片结合后，仅在中性pH区域观察到双寿命的存在，并且长寿命成分的含量很低。很可能bR分子在光适应状态下有两种构象同时存在。根据整个实验结果，对bR的质子泵功能机制及其构象进行了探讨，以此作为本论文的结论。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 高能物理 |
| 公开日期 | 2016-02-25 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.ihep.ac.cn/handle/311005/210272]  |
| 专题 | 多学科研究中心_学位论文和出站报告 |
| 作者单位 | 中国科学院高能物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 生文君. 硕士论文-紫膜表面电位及蛋白质构象的荧光探针研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 1989. |
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